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ztonyc捐助貴賓 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于構(gòu)載體過程中PCR驗(yàn)證正確但是測序?yàn)榭蛰d體的困惑
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各位好， 我在構(gòu)建3KB以上的片段上終載時，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)挑的克隆PCR鑒定大小正確，正負(fù)對照也都沒問題。但是無論酶切或測序都發(fā)現(xiàn)是空載體。 長片段可能構(gòu)建上會有難度，但是我認(rèn)為沒構(gòu)建成功應(yīng)該P(yáng)CR鑒定該位置也擴(kuò)不出條帶才對。為什么總能擴(kuò)增出來？而且不同的構(gòu)建確實(shí)P出的條帶大小都符合實(shí)際的大小。難道未連接上的目的片段也能夠轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸菌中？或者構(gòu)上的載體有高級結(jié)構(gòu)測序不出？ 小片段構(gòu)建都沒出現(xiàn)過這個問題，真的很想把原因搞清楚，求助于大家��！希望能得到大家的幫助！  |
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John_Chen
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feilinshiji
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8樓2013-10-08 09:49:38
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