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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 怎么做融合蛋白？
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1989zb金蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎么做融合蛋白？
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現(xiàn)在準備做一個融合蛋白，有兩種方法不知道該用哪種好呢？ 第一種：通過去掉第一個蛋白的終止子，用linker連接第二個蛋白，不知道怎么選擇linker? 第二種：通過融合PCR 擴增出兩個蛋白的基因全長 ，第一個蛋白的基因序列也去掉終止子， 請問這兩種方法哪種更好點呢？？？ 還有就是怎么設計linker呢？ |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
1989zb: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-10-13 09:36:51
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構建融合蛋白的基本原則是， 將第一個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第二個蛋白基因，以實現(xiàn)兩個基因的共同表達。具體步驟有： 1.進行目的基因的克�。焊鶕�(jù)基因序列互補原則 ，設計合適的引物序列，以cDNA為模板，利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。 2.在載體中進行重組：通過限制內(nèi)切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收，然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接，并克隆到高表達質(zhì)粒載體中，構建重組質(zhì)粒。 3.將重組表達載體轉(zhuǎn)染宿主細胞并利用選擇標志進行篩選及測序。 4.融合基因的誘導表達及表達蛋白的純化 。 |
3樓2013-10-13 07:46:23
1989zb
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4樓2013-10-13 09:36:40
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