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胡化靜木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
sfiI和NotI雙酶切
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我想做sfiI和NotI雙酶切，因?yàn)閮烧呙盖蠦uffer不一樣，所以只能單酶切。如圖，第2、3泳道是先sfiI單酶切，然后在混合物中直接加入NotI及Buffer，進(jìn)行NotI單酶切。結(jié)果看不見(jiàn)切下的700bp片段，只有四千多的大片段。第4、5泳道是先sfiI單酶切，然后電泳、膠回收，進(jìn)行NotI單酶切。結(jié)果就看不見(jiàn)條帶了。我該怎么切，才能切下來(lái)？ 無(wú)標(biāo)題-1.jpg |
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woai43
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| 兩個(gè)酶buffer不同還是需要單酶切后再回收吧。你sfiI單酶切割膠回收后有沒(méi)有電泳檢測(cè)？有可能你膠回收損失太多了，后面再進(jìn)行NotI單酶切由于沒(méi)有DNA了所以電泳就看不到了。你第一個(gè)酶切過(guò)先電泳看下DNA的量，再做第二個(gè)酶切。 |
2樓2013-10-18 16:48:50
xiaozhou0904
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3樓2013-10-18 17:00:28
胡化靜
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4樓2013-10-18 18:57:13
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