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擬南芥kana抗性篩選
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| 我想進(jìn)行擬南芥篩選，抗性為kana,,具體操作步驟是怎么的呢？ |
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cicelyzh
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2樓2013-10-18 23:39:39
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cicelyzh
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4樓2013-10-20 01:04:38
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5樓2013-10-20 10:23:49
yudaoqian88
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-05 11:53:30
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-05 11:53:30
 樓上說(shuō)的都切中要害，就是在萌芽的普通培養(yǎng)基中加上kan篩選，轉(zhuǎn)基因的種子有抗性，可以在上面生長(zhǎng)，而普通種子則慢慢發(fā)黃死去，如此達(dá)到篩選轉(zhuǎn)基因苗的目的！ 無(wú)論從時(shí)間上還是工作量方面講，轉(zhuǎn)基因的種子得來(lái)都不易，所以有幾個(gè)細(xì)節(jié)需要注意！1）擬南芥比較脆弱，如果條件摸索不好，種植比較難以成功，所以建議樓主篩選的時(shí)候分批次種植，留點(diǎn)種子備用，以防萬(wàn)一！ 2）培養(yǎng)基萌芽特別容易污染，而抗性板篩選相對(duì)而言生長(zhǎng)周期長(zhǎng)點(diǎn)，所以避免污染是至關(guān)重要的。所以建議樓主這樣：  擬南芥種子收取時(shí)盡量只收取果莢（全部裝塑料袋再收種子容易有雜質(zhì)，分不開(kāi)），精心處理，去除雜志；備份一些種子分批種植，種植的種子先用70%-75%酒精浸泡消毒10分鐘左右，期間間斷性地顛倒。倒去酒精，改用升汞或者20%漂漬液（普通種植此步即可）浸泡消毒10分鐘，方法同上。后用滅菌的dd水洗3-5遍；超凈臺(tái)內(nèi)待抗性平板吹干后，用無(wú)菌槍頭將種子轉(zhuǎn)移至平板上，加幾毫升無(wú)菌水，小幅度上下左右慢慢晃動(dòng)，待種子分布較為均勻時(shí)抽去一些水，繼續(xù)晃動(dòng)，知道達(dá)到理想分布，然后抽盡可見(jiàn)水分，超凈臺(tái)內(nèi)吹干。操作期間切記手在培養(yǎng)基上方晃動(dòng)，盡可能降低污染的機(jī)會(huì)！封口膜可口！4度冰箱（正著放）春化兩天，如有必要，可再次放入超凈臺(tái)吹干，封口膜封口！轉(zhuǎn)入溫室培養(yǎng)培養(yǎng)期間可增施營(yíng)養(yǎng)液，適量澆水，避免過(guò)干或過(guò)濕。經(jīng)常查看，一看環(huán)境溫度，二看水分，三看是否有蘑菇蠅或者蚜蟲滋生！ 祝樓主一切順利！ |
6樓2013-11-04 20:45:08
7樓2013-11-05 00:01:29
yudaoqian88
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8樓2013-11-05 20:38:48
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