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植物表達蛋白，能看到熒光，westernblot 卻雜不出來，為什么？
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在植物體中，表達了一個融合GFP的蛋白，看熒光是有的，然后取樣做western，卻雜不出來，陽性對照能雜出來，請問大家有沒有遇到這種情況？ 我把頭皮想破了還是想不出為什么....謝謝！ |
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 蛋白質(zhì)生物學實驗經(jīng)驗 |
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【答案】應助回帖
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kx444555: 金幣+4, 鼓勵交流 2013-10-23 10:38:19
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最可能的一種情況，目的蛋白質(zhì)與GFP共價連接后的新的蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，GFP那部分還是天然構(gòu)象，但是目的蛋白的表位因為目地蛋白質(zhì)折疊異常或者因為GFP形成的空間位阻使得抗原表位被遮蓋。可以用蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)預測軟件預測一下目的蛋白質(zhì)與GFP共價連接后的新的蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，看看目的蛋白質(zhì)的構(gòu)象與天然構(gòu)象是不是發(fā)生了改變。 目的蛋白質(zhì)與GFP共價連接之間的肽鏈也該是數(shù)個親水的氨基酸殘基，這樣對于目的蛋白質(zhì)與GFP各自的折疊影響較小。 |
4樓2013-10-23 10:16:28
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8樓2013-11-16 15:32:36
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