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lb3522922銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
二次PCR
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| 最近再做PCR，第一次的產(chǎn)物不特異，切膠回收后濃度有30ng/μL左右，然后以此為模板進(jìn)行第二次PCR，具體做法是取1微升模板，引物與前次PCR相同，但是產(chǎn)物跑電泳卻沒有條帶，只有引物二聚體附近的小條帶。增加模板的量也不行，不知道問題出在什么地方了。請(qǐng)各位給分析分析。不勝感激。 |
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cicisnow
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2樓2013-10-28 21:00:23
lb3522922
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7樓2013-10-29 13:58:42
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-29 23:54:26
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樓主，這個(gè)問題曾經(jīng)困擾我了很久。 我的經(jīng)驗(yàn)是二次PCR 效果都不是太好，如果需要改進(jìn)的話我有兩個(gè)辦法： 1.就是設(shè)計(jì)巢式PCR引物，這樣效果會(huì)好點(diǎn)； 2.就是把你的片段連到載體里，克隆擴(kuò)增，酶切也可以；或者用質(zhì)粒為模板也可以。 建議你不要在這方面浪費(fèi)太多的時(shí)間，盡快跳過這一步，重新設(shè)計(jì)引物 ，或者連載體都不會(huì)花很多時(shí)間的 |
8樓2013-10-29 21:48:58
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