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benedictchau銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于發(fā)酵液中蛋白提取 已有2人參與
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大牛們，小弟研一 剛做了一株菌，老板想讓我分析一下它的抑菌物質(zhì)具體成分， 跑過活性電泳 有帶但是回收后感覺沒有抑菌活性了- - 大家還有什么好的建議么？ 我想先看看這個到底是不是蛋白質(zhì) |
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4樓2013-10-27 00:44:37
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7樓2013-10-28 23:16:18
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
laozuzunzhe: MicEPI+1, 鼓勵熱心應助！ 2013-10-30 21:17:14
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
laozuzunzhe: MicEPI+1, 鼓勵熱心應助！ 2013-10-30 21:17:14
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可以是可以，但是你的這個物質(zhì)最好是能定量，確切知道進行了某一個處理之后能夠保留多少。牛津杯法不知道能不能精確定量，這個方法挺麻煩的。 處理方法不宜一下子就進行兩個，比如超濾和煮沸這兩個，如果之前都不知道每一個方法的效果，結(jié)合起來就更加說不清了。哪一步處理之后有多純，回收多少，最怕就是糊里糊涂的做，做完之后也還是糊里糊涂。 為什么要一開始就確定是不是蛋白質(zhì)？假如是幾個氨基酸殘基的寡肽，沒有二級結(jié)構(gòu)的，即使是煮沸也不會滅活的。而即使是蛋白質(zhì)，也不一定就不能耐受萃取中的有機溶劑，就像是某些酶能耐受高濃度有機溶劑，例如： Biochemical characterization of an extracellular polyextremophilic alpha-amylase from the halophilic archaeon Halorubrum xinjiangense有機溶劑.pdf Effect of non aqueous solvent on structural stability of alpha-amylase A cost-effective prospective for protein stabilization有機溶劑.pdf 2012年 有機溶劑 IF(2011)=1.683 Purification and characterization of an organic solvent-tolerant alkaline cellulase from a halophilic isolate of Thalassobacillus.pdf 2012年 有機溶劑 IF(2011)=2.735 Purification and characterization of an organic-solvent-tolerant cellulase from a halotolerant isolate, Bacillus sp. L1.pdf 最好就是設計一些方案來分離，按照分離效果來一步步減少雜質(zhì)，最終得到純品，這下子再鑒定就完全明白了，在此之前的都只能是猜測。別偷懶，在等待的時間里可以同時嘗試，不要等菌長的時候就去看PPS。 你的這句“跑過活性電泳 有帶但是回收后感覺沒有抑菌活性了”是什么意思？“活性電泳”、“有帶”、“回收”、“感覺”這四個詞，我猜你的這個實驗出了問題了，設計上或者操作上�；钚噪娪竞头亲冃噪娪臼遣煌模亲冃噪娪臼潜３址亲冃�，但活性電泳不一定要保持非變性，只要能復性就行，而且要體現(xiàn)出活性。我猜你是跑了非變性電泳然后把蛋白質(zhì)條帶割下來回收了。這么做有一個前提，那就是這個物質(zhì)肯定是蛋白質(zhì)，而且能跑膠跑得出來，但其實這個物質(zhì)還不一定是蛋白質(zhì)。“感覺”這個詞令我懷疑有沒有準確定量。不管怎么說，還是把自己的實驗步驟操作試劑分析放上來的好。 |
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2013-10-30 19:09:03, 1.68 M
11樓2013-10-30 19:17:08
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18樓2013-11-01 10:53:03
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