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諾曼底1227鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
immunocytochemistry實驗的問題
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最近在做用一些細胞的surface marker antibody來染細胞，并且通過熒光顯微鏡來觀察這些marker的表達情況，但不知道為什么總是只能觀察到DAPI染的細胞核，而看不到surface marker的表達。不過我做過flow，flow結(jié)果現(xiàn)實的是positive results，所以覺得可能是我實驗操作的問題，所以想請教一下各位高手，能不能幫我看一下我的實驗步驟有什么問題，多謝 實驗基本步驟如下： 1. 用2% formalin固定30min 2. 將antigen retrieval buffer（我用的是Tris-EDTA, 10mM Tris Base, 1mM EDTA, 0.05% Tween 20, pH 9.0)煮沸，將種有細胞的slide放進去，煮大概20min； 3. 用1% BSA-PBS溶液block 1h，室溫； 4. 用blocking buffer稀釋的CD29一抗來和slide孵育2h, 室溫； 5. 用blocking buffer稀釋的含有FITC的二抗和slide孵育1h，室溫； 6. 用PBS洗slide三次，每次5min； 7. 用DAPI染色 大概步驟就是上面所說的。 不知道有什么問題沒有？我也問過買CD29的公司，他們的回復(fù)是說CD29可以用作ICC的，但必須要做antigen retrieval這一步。 請各位幫幫忙，多謝 |
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