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再見獨(dú)奏鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)幫忙翻譯或者找出這兩項(xiàng)操作的英文說明
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之前沒有看過太多的英文文獻(xiàn)，我覺得應(yīng)該有直接的英文表達(dá) 求大神幫忙啊。。。蛋白質(zhì)的提取、純化與定量 采用三氯乙酸/丙酮法制備大白菜葉片蛋白質(zhì)丙酮干粉：稱取1g材料，加入液氮研成粉末；移入10ml的離心管中，加入7ml預(yù)冷的10%TCA（丙酮配制，內(nèi)含0.07%β-巰基乙醇），充分渦旋后-20℃下過夜，4℃、15000×g條件下離心30min，棄上清；加入7ml預(yù)冷丙酮（含0.07%β-巰基乙醇），渦旋混勻，-20℃沉淀2小時(shí)，期間每隔一定時(shí)間振蕩一次，4℃、15000×g條件下離心30min，棄上清；加入7ml 80%冷丙酮（含0.07%β-巰基乙醇），渦旋混勻-20℃沉淀2小時(shí)，同上離心；將沉淀冷凍干燥成粉末，直接裂解或-80℃保存?zhèn)溆谩０疵縨g蛋白質(zhì)樣品干粉加入10-20μl樣品裂解液（7.0 mol/L尿素（Urea）、2.0 mol/L硫尿（thiourea）、4%（w/v）CHAPS、60 mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）、0.5%（v/v）IPG buffer）溶解，35℃恒溫水浴2h或反復(fù)液氮凍融3次（期間充分渦旋），樣品溶解后同上離心，取上清液。采用Bradford 蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。 雙向電泳（2-DE） 上樣量為200ug，樣品用上樣緩沖液（7.0 mol/L尿素（Urea）、2.0 mol/L硫尿（thiourea）、4%（w/v）CHAPS、60 mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）、0.5%（v/v）IPG buffer）稀釋。沿IPG膠條槽緩慢均勻加入，將IPG膠條膠面朝下覆蓋在樣品上, 用2ml礦物油覆蓋，防止樣品揮發(fā)。設(shè)置等電聚焦程序(24cm,PH=4-7)，膠條水化和等電聚焦按IPGphorⅡTM等電聚焦系統(tǒng)指南進(jìn)行。運(yùn)行環(huán)境為20℃恒溫下，50V水化12 h后；按500V，1h；1000V，1 h；1000-8000V，1 h；8000V，10 h；500V，10 h。等電聚焦結(jié)束后，將膠條在平衡液A（6.0 mol/L尿素（Urea）；2%（w/v）SDS；30%Glycerol；1.5 M Tris-HCl（pH8.8）；65 mM DTT），搖床振蕩平衡15min；平衡液B（6.0mol/L尿素（Urea）；2%（w/v）SDS；30%Glycerol， 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）；135mmol/l碘乙酰胺），水平搖床平衡15分鐘。采用EttanTM DALT Six垂直板電泳系統(tǒng)進(jìn)行第二向SDS-PAGE恒溫（18℃）電泳，起始時(shí)用低電流10mA，待樣品在完全走出IPG膠條，濃縮成一條線后，再加大電流至20mA，溴酚藍(lán)前沿到達(dá)距玻璃板底部1cm處，結(jié)束電泳。采用銀染法，30min。 |
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