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Ecoli BL21 DE3表達(dá)蛋白時(shí)突然變澄清，但非噬菌體污染，究竟是怎么回事？ 已有11人參與
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最近利用Ecoli BL21 DE3/pET28a生產(chǎn)蛋白，小搖瓶培養(yǎng)很正常,IPTG誘導(dǎo)后蛋白活性也很好；但在7L發(fā)酵罐中，起初培養(yǎng)還算正常，加入IPTG之后不久菌就越搖越稀，感覺(jué)像裂解了。檢查噬菌斑也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)噬菌體污染，也嘗試了各種培養(yǎng)基，也不行。不知各位有沒(méi)有碰到過(guò)類似情況，該如何解決？ [ Last edited by quxd on 2013-10-31 at 12:16 ] |
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2樓2013-10-31 12:22:41
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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如該現(xiàn)象已經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)確證，應(yīng)該是表達(dá)蛋白具有細(xì)胞毒性所致，該種誘因最明顯的特點(diǎn)就是誘導(dǎo)后細(xì)胞逐漸死亡（死亡速度低于噬菌體感染），但仍然會(huì)存余活菌（質(zhì)粒丟失所致）。如想避免，可降低溫度，降低IPTG使用量，延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間試試；如果效果不明顯，可換有細(xì)胞毒性耐受的宿主菌或?qū)δ繕?biāo)蛋白進(jìn)行融合表達(dá)。 [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶端 ] [ Last edited by eastrocket on 2013-11-1 at 06:05 ] |
7樓2013-11-01 05:43:35
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