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有沒(méi)有哪位大蝦做過(guò)重組質(zhì)粒在細(xì)胞膜表達(dá)？
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前段時(shí)間剛做完質(zhì)粒構(gòu)建，迫不及待轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞看一下，轉(zhuǎn)染的是CHO細(xì)胞，轉(zhuǎn)然后培養(yǎng)了大概48個(gè)小時(shí)，目的基因是在細(xì)胞膜表達(dá)的，轉(zhuǎn)染后做了一個(gè)細(xì)胞免疫熒光，拍下圖片發(fā)現(xiàn)除了細(xì)胞核沒(méi)有染色外，細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞膜都染色了，而且細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)也看的不是很清楚，想問(wèn)問(wèn)各位大蝦： 1、是我的質(zhì)粒有問(wèn)題導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)染色還是轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后就會(huì)這樣？ 2、如何才能讓在細(xì)胞膜表達(dá)的基因轉(zhuǎn)染后只在CHO細(xì)胞膜表達(dá)？ PS:如果有這方面的文獻(xiàn)求發(fā)來(lái)參考下哈。 1.jpg 2.jpg [ Last edited by sars37 on 2013-11-4 at 21:00 ] |
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sars37
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4樓2013-11-05 16:38:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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呵呵。你這個(gè)問(wèn)題太高深了。表達(dá)出蛋白就不是很容易了。而特定位置那和表達(dá)關(guān)系不大。是轉(zhuǎn)運(yùn)裝配問(wèn)題了。 涉及這里面通路的各種孔道蛋白和跨膜蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)。 。 無(wú)論是否異體還是原味表達(dá)�；虮磉_(dá)出的蛋白要想到達(dá)特定位置，得有負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)他的特異性孔道蛋白，如果要出膜，那就需要負(fù)責(zé)定位和轉(zhuǎn)運(yùn)的跨膜蛋白，而且是特異性的。這和抗原抗體等結(jié)構(gòu)匹配性是類同的。 原核的蛋白表達(dá)應(yīng)該比真核簡(jiǎn)單。我們做的就是原核的表達(dá)，但是我們要得到特異位置表達(dá)的蛋白還真沒(méi)發(fā)現(xiàn)這個(gè)技術(shù)。如果你是要得到膜上的蛋白�？梢约狱c(diǎn)幫助轉(zhuǎn)運(yùn)的核苷酸或者標(biāo)簽試試。能幫助轉(zhuǎn)運(yùn)到膜上。這個(gè)東西搜搜就有很多因?yàn)樽龅臇|西不是細(xì)胞。我沒(méi)把握是否是這樣弄，但是原理是這樣的。 |
3樓2013-11-05 12:54:28
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5樓2013-11-05 17:19:26
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6樓2013-11-05 21:10:13
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