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wanghf_6134新蟲 (初入文壇)
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[求助]
pEASY-T1 Cloning Kit 基因克隆相關(guān)問題
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1.上回不小心用無(wú)菌水水配X-gal，發(fā)現(xiàn)不溶，又加了二甲基甲酰胺才把它溶了，這是唯一的補(bǔ)救措施了。但是，現(xiàn)在糾結(jié)要不要像IPTG一樣，用0.22um的濾膜給它過濾（原來只有二甲基甲酰胺據(jù)說是不用的，但現(xiàn)在多了一個(gè)無(wú)菌水），這樣做會(huì)不會(huì)把X-gal擋在外面？或者其他什么情況？ 2.藍(lán)白班培養(yǎng)，因?yàn)樯L(zhǎng)速度有些不同，能不能在冰箱里放一段時(shí)間組織它生長(zhǎng)，它長(zhǎng)出來的斑用掉，再放回恒溫箱，還會(huì)再長(zhǎng)嗎？如果僅考慮到冰箱溫度的問題，而不是時(shí)間。如果是時(shí)間，大概24個(gè)小時(shí)后，就不會(huì)長(zhǎng)了吧？ 3.用感受態(tài)trans1-t1 做克隆，培養(yǎng)基要調(diào)到多少呢？7.0？ |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
wanghf_6134: 金幣+3 2013-11-06 15:55:34
wanghf_6134: 金幣+3 2013-11-06 15:55:34
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2. 反復(fù)放培養(yǎng)箱會(huì)有雜菌長(zhǎng)出來，會(huì)很容易出現(xiàn)衛(wèi)星菌落，你說用比菌落大的直徑孔去挑，你同學(xué)說不可取，會(huì)有雜菌，但你已經(jīng)做了，我認(rèn)為影響不大，如果是雜菌的話，在抗性培養(yǎng)基里是長(zhǎng)不起來的，36小時(shí)才長(zhǎng)起來的，一般都不對(duì)，何況你用的是Trans1-T1感受態(tài)，這個(gè)菌株長(zhǎng)的飛快，9小時(shí)就可以挑菌落了 3. LB培養(yǎng)基沒有那么嚴(yán)格，白斑長(zhǎng)的少不是平板的問題 |
4樓2013-11-06 10:14:11
gyesang
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2樓2013-11-06 01:53:58
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5樓2013-11-06 13:09:22
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