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Stefanie旭鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
有關(guān)制備型液相色譜的應(yīng)用~~~
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各位大牛專家好：一瓶真菌發(fā)酵液，其中含某種抑制革蘭氏陽性菌抑菌劑，疑為頭孢，但不確定。已經(jīng)過各種方法除去了發(fā)酵液中的大部分糖類、蛋白質(zhì)、色素...經(jīng)過查相關(guān)文獻(xiàn)，可以用 制備型液相色譜進(jìn)行進(jìn)一步分離得到純品，不知道可行否？利用該儀器，對樣品有啥要求？量多大？柱子條件應(yīng)該怎么選擇？怎么確定保留時(shí)間？以及怎樣收集純品？希望高人指導(dǎo)...若此法不可行，另有鑒定純度方法最妙！求高人賜教，感激不盡吶 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Stefanie旭(release53代發(fā)): 金幣+2, 謝謝 2013-11-07 18:17:08
Stefanie旭: 金幣+18, ★★★★★最佳答案, 嗯，您的回復(fù)和我預(yù)想的差不多，還是您專業(yè)的解讀后心里比較踏實(shí)啊，謝謝啦 2013-11-08 21:55:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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絕對可行， 樣品要求：易溶解，有無紫外吸收關(guān)系不大（有MS導(dǎo)向），樣品的HP范圍最好在4-10之間，無金屬離子催化劑（如鈀催化劑什么的），反相不能用二氯甲烷溶解，真相不能水這些都知道的哈？ 分離范圍：1mg-？（上不封頂只要你能出得起錢�。� 柱子條件：主要看你樣品的性質(zhì)了，克級的柱子狠多都是自己填的 250*50 mm 5u 的， 毫克級的基本是商品柱比較多，也有用HPLC分離的（比較慢） 保留時(shí)間：有對照品的話最好，無對照品給個(gè)結(jié)構(gòu)式 或者 MS都行，樣品情況好（因?yàn)槟阋呀?jīng)預(yù)處理過了）的話能把所有的物質(zhì)都分離開。 收集純品：通常是先在HPLC上開發(fā)方法，再轉(zhuǎn)移到制備型液相色譜上去的。有對照品的話直接HPLC定位，再看目標(biāo)峰的特定吸收波長下的吸收強(qiáng)弱（比如 220nm 254nm)為方法的轉(zhuǎn)移提供參考，沒對照有MS的話，直接上LCMS定位。然后就是轉(zhuǎn)移到制備上了把峰切下來收集起來就OK了;如果什么都沒有，那就只能全部收集，你自己拿回去再慢慢點(diǎn)板做核磁吧。 大概就這么多吧，希望能幫到你~ |
4樓2013-11-07 17:13:51
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6樓2013-11-08 21:45:53
Stefanie旭
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7樓2013-11-08 21:46:36
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，這一點(diǎn)你確實(shí)也說對了。我說咋跟老師提出這個(gè)方案的時(shí)候，他找各種理由挑刺啊，看來是怕花錢。。。
。沒辦法，我已經(jīng)想了 很多方法查了很多文獻(xiàn)，終于看見曙光了，卻發(fā)現(xiàn)，困難重重，不過，真是謝謝你�。� 8樓2013-11-08 21:58:01
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