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搞不好你這個(gè)菌種不純，里面有多種質(zhì)粒

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11樓2013-11-15 10:51:59

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jennifermatt

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提出質(zhì)粒后直接單切或者雙切。
再電泳。
直接質(zhì)粒電泳出現(xiàn)多條帶，也很正常。

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求是

12樓2013-11-15 10:53:49

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chjinzhi

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4樓: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 20:56:55
那我應(yīng)該還是要先把提取到的質(zhì)粒膠回收一下再去做酶切吧？還是直接拿提取的質(zhì)粒做酶切？謝謝啊...

不用回收，直接去做酶切就行，把酶切產(chǎn)物拿去跑電泳。

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13樓2013-11-15 11:00:44

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7樓: Originally posted by applezhao at 2013-11-14 22:20:11
那單酶切的體系你知道嗎？我們實(shí)驗(yàn)室?guī)熃愣际侵苯与p酶切的，不知道單酶切的體系...

一樣的呀，只不過加入的酶只有一個(gè)而已嘛！按照說明書上的體系就行

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14樓2013-11-15 11:01:47

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14樓: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-15 11:01:47
一樣的呀，只不過加入的酶只有一個(gè)而已嘛！按照說明書上的體系就行...

今天我做了酶切，發(fā)現(xiàn)片段不在5000bp那，在大概6000多bp的地方有條帶，我的質(zhì)粒是5000bp的，這樣是不是能確定我提的不是我需要的質(zhì)粒��？

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命里有時(shí)終須有，命里無時(shí)莫強(qiáng)求

15樓2013-11-15 21:26:32

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10樓: Originally posted by gyesang at 2013-11-15 10:27:08
BL21是表達(dá)菌株，不適合從BL21里面提取質(zhì)粒，具體的你可以看看BL21的基因型

我?guī)熃阋彩菑腂L21里面提的，她去年大概這個(gè)時(shí)候提的，已經(jīng)連接表達(dá)出來了，會(huì)不會(huì)因?yàn)闀r(shí)間長(zhǎng)質(zhì)粒變異了�。�

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命里有時(shí)終須有，命里無時(shí)莫強(qiáng)求

16樓2013-11-15 21:29:52

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11樓: Originally posted by ivyvampire at 2013-11-15 10:51:59
搞不好你這個(gè)菌種不純，里面有多種質(zhì)粒

我?guī)熃銖倪@個(gè)里面都提出來了，很簡(jiǎn)單按照試劑盒一次就提出來了，不知道為什么我的一直卡在了這

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命里有時(shí)終須有，命里無時(shí)莫強(qiáng)求

17樓2013-11-15 21:31:06

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12樓: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-15 10:53:49
提出質(zhì)粒后直接單切或者雙切。
再電泳。
直接質(zhì)粒電泳出現(xiàn)多條帶，也很正常。

今天我做了酶切，發(fā)現(xiàn)片段不在5000bp那，在大概6000多bp的地方有條帶，我的質(zhì)粒是5000bp的，這樣是不是能確定我提的不是我需要的質(zhì)粒啊？

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18樓2013-11-15 21:34:17

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帶走云彩

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2樓: Originally posted by chjinzhi at 2013-11-14 18:54:05
提取出來的質(zhì)粒沒有做酶切，直接去跑電泳只能說明你有么有提到質(zhì)粒。你若要判斷它的真實(shí)大小，就要先在酶切，然后去跑電泳。
因?yàn)�，你提取出來的質(zhì)粒的螺旋程度不一樣，條帶就會(huì)有多條。即使你提出來的質(zhì)粒只有一種 ...

正解！

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怎知一死生為虛誕？

19樓2014-05-06 19:33:41

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meng_xu

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首先，BL21是表達(dá)質(zhì)粒，它不是recA mutant，你提取的時(shí)候，要記得用PB好好洗。

其次，質(zhì)粒提取之后，大小不能完全用跑膠判斷，一定要做酶切，至于是單還是雙還是更多的酶切，由你質(zhì)粒的酶切圖譜決定。

最后，提取質(zhì)粒，最后是溶解在elution buffer里的，也就是10mM Tris，直接切就可以。

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20樓2014-05-07 03:51:15

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