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[求助]
【求助】小鼠肝細(xì)胞檢測(cè)ROS（DCF探針）陽(yáng)性對(duì)照無(wú)熒光 已有1人參與
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第一次實(shí)驗(yàn)小鼠肝細(xì)胞加染毒液后在完全培養(yǎng)基中37度孵育24h，用37度溫育的HANKS洗兩次后用DCF探針37度避光孵育30min，再用溫育的HANKS洗掉探針后，熒光顯微鏡下藍(lán)光激發(fā)檢測(cè)，陽(yáng)性對(duì)照和樣品組細(xì)胞都無(wú)熒光，細(xì)胞碎片熒光很亮。 第二次實(shí)驗(yàn)取小鼠原代肝細(xì)胞后先用DCF37度避光孵育30min，洗完后用染毒液37度分別孵育30min,1h,2h,熒光顯微鏡下看陽(yáng)性對(duì)照和樣品組細(xì)胞還是沒(méi)有熒光。 DCF是sigma買的，用DMSO配的母液，HANKS稀釋的。 陽(yáng)性對(duì)照雙氧水500uM 基本實(shí)驗(yàn)步驟都是按照碧云天的ROS試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行的，求助為什么細(xì)胞無(wú)熒光？ |
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3樓2016-03-16 22:10:25
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