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dongqin725金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助~~噬菌體抗體庫的構(gòu)建
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各位大俠，我在做抗藥的噬菌體抗體庫，先免疫balb/c小鼠，然后取其脾臟提取RNA，RNA反轉(zhuǎn)錄到cDNA第一鏈，再用cDNA分別擴(kuò)增重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因，所用的引物是《重組抗體》（沈倍奮等 著）里的用于擴(kuò)增鼠源scFv單鏈抗體基因的引物，但是一直PCP不出來，求大神指點(diǎn)！��！十分感謝！��！ 引物序列如下： 1) 重鏈可變區(qū)5’端引物 VH1back 5’-AGG TSM ARC TGC AGS AGT CWGG-3’ 2) 重鏈可變區(qū)3’端引物 VH1-2for 5’-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC-3’ 3) κ鏈可變區(qū)5’端引物 Vκ2back 5’-GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA -3’ 4) κ鏈可變區(qū)3’端引物 MJκ1for 5’-CCG TTT GAT TTC CAG CTT GGT GCC -3’ MJκ2for 5’-CCG TTT TAT TTC CAG CTT GGT CCC -3’ MJκ4for 5’-CCG TTT TAT TTC CAA CTT TGT CCC -3’ MJκ5for 5’-CCG TTT CAG CTC CAG CTT GGT CCC -3’ |
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紫鈴清風(fēng)li
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2樓2014-11-10 15:07:30
dongqin725
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3樓2014-11-11 17:52:24
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