版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

返回列表

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如題，要做gateway克隆，不知道普通的加A TAQ酶能不能用，還有就是必須的是25bp嗎？有的文章中在25bp基礎(chǔ)上加了個(gè)GGGG是什么意思？

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有98人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn) 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2013-12-02 11:50:45

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-06 14:39:59

加上4個(gè)G，好像是提高重組反應(yīng)的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，長(zhǎng)片段用的高保真的酶，都能成

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-12-02 16:47:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

2樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-12-02 16:47:32
加上4個(gè)G，好像是提高重組反應(yīng)的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，長(zhǎng)片段用的高保真的酶，都能成

有人告訴我設(shè)計(jì)引物時(shí)在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2013-12-03 11:56:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
fanwq258: 金幣+5 2014-04-01 19:45:18

引用回帖:

3樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告訴我設(shè)計(jì)引物時(shí)在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列嗎？...

這個(gè)是TOPO克隆的，需要TOPO酶。加attB是用來(lái)做BP反應(yīng)的，需要BP重組酶兩種都是構(gòu)建entry載體的方法

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2013-12-03 15:35:57

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

4樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-12-03 15:35:57
這個(gè)是TOPO克隆的，需要TOPO酶。加attB是用來(lái)做BP反應(yīng)的，需要BP重組酶兩種都是構(gòu)建entry載體的方法...

那我還得買(mǎi)個(gè)TOPO酶了啊，還得bp反應(yīng)試劑盒，lr反應(yīng)試劑盒？

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2013-12-03 15:56:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-09 21:01:17

引用回帖:

5樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 15:56:55
那我還得買(mǎi)個(gè)TOPO酶了啊，還得bp反應(yīng)試劑盒，lr反應(yīng)試劑盒？...

看你目的了，目的載體上如果是attR位點(diǎn)的話(huà)，那就要買(mǎi)TOPO或者BP中的一個(gè)，再加一個(gè)LR。如果載體上是attP位點(diǎn)，那就只要TOPO或者BP中的一個(gè)，不需要LR

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2013-12-03 19:44:57

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

434744419

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 988.8
帖子: 128
在線(xiàn): 27小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 601633

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

如果加CACC 就不需要B序列。主要是看你選擇什么樣的入門(mén)載體，不過(guò)無(wú)論哪種，都是invitrogen的。我以前做過(guò)，就是加的CACC.比加B序列方便。

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2013-12-04 08:32:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

6樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-12-03 19:44:57
看你目的了，目的載體上如果是attR位點(diǎn)的話(huà)，那就要買(mǎi)TOPO或者BP中的一個(gè)，再加一個(gè)LR。如果載體上是attP位點(diǎn)，那就只要TOPO或者BP中的一個(gè)，不需要LR...

反應(yīng)體系為:
組分             使用量
PCR產(chǎn)物             2.0 μl
Salt solution    0.5 μl
pENTR D-TOPO 載體    0.5 μl
總體積             3.0 μl
　　于22.5℃過(guò)夜連接反應(yīng)。
那請(qǐng)問(wèn)這個(gè)算什么反應(yīng)呢？有人跟我說(shuō)是BP反應(yīng)，但是沒(méi)用酶啊，有TOPO載體

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2013-12-05 12:31:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jasco

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
金幣: 1626.1
帖子: 991
在線(xiàn): 82小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 287776

引用回帖:

這個(gè)是正解

回復(fù)此樓

9樓2013-12-05 13:03:45

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

7樓: Originally posted by 434744419 at 2013-12-04 08:32:17
如果加CACC 就不需要B序列。主要是看你選擇什么樣的入門(mén)載體，不過(guò)無(wú)論哪種，都是invitrogen的。我以前做過(guò)，就是加的CACC.比加B序列方便。...

那你能夠具體給我說(shuō)一下怎么做嗎？我的載體是attR位點(diǎn)的

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2013-12-05 15:42:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

10樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 15:42:02
那你能夠具體給我說(shuō)一下怎么做嗎？我的載體是attR位點(diǎn)的...

我發(fā)給你個(gè)ppt看看吧，其實(shí)你可以百度下的網(wǎng)上有很多介紹gateway技術(shù)的

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖附件資源列表

歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲(chóng)僅提供交流平臺(tái)，不對(duì)該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶(hù)自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識(shí)產(chǎn)權(quán)問(wèn)題，其責(zé)任在于用戶(hù)本人，如對(duì)版權(quán)有異議，請(qǐng)聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com
附件 1 : Gateway_載體構(gòu)建.ppt

2013-12-05 16:31:44, 417.5 K

11樓2013-12-05 16:32:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

引用回帖:

8樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 12:31:11
反應(yīng)體系為:
組分             使用量
PCR產(chǎn)物             2.0 μl
Salt solution    0.5 μl
pENTR D-TOPO 載體    0.5 μl
總體積             3.0 μl
　　于22.5℃過(guò)夜連接反應(yīng)。
那請(qǐng)問(wèn)這個(gè)算什么反應(yīng)呢？ ...

你用TOPO載體那肯定是TOPO反應(yīng)，酶的話(huà)已經(jīng)在試劑里面，但沒(méi)標(biāo)出來(lái) 。體系跟我之前做的是一樣的

贊一下

回復(fù)此樓

12樓2013-12-05 16:34:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

12樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-12-05 16:34:05
你用TOPO載體那肯定是TOPO反應(yīng)，酶的話(huà)已經(jīng)在試劑里面，但沒(méi)標(biāo)出來(lái) 。體系跟我之前做的是一樣的...

請(qǐng)問(wèn)，我現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室就只有g(shù)ateway的表達(dá)載體，其他東西都的買(mǎi)，哪種方法可以最省錢(qián)呢？

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2013-12-05 18:24:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

請(qǐng)問(wèn)，我現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室就只有g(shù)ateway的表達(dá)載體，其他東西都的買(mǎi)，哪種方法可以最省錢(qián)呢？

贊一下

回復(fù)此樓

14樓2013-12-05 18:24:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
fanwq258: 金幣+5 2013-12-05 21:39:21

引用回帖:

13樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 18:24:05
請(qǐng)問(wèn)，我現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室就只有g(shù)ateway的表達(dá)載體，其他東西都的買(mǎi)，哪種方法可以最省錢(qián)呢？...

買(mǎi)TOPO的話(huà)它里面就有TOPO載體了，買(mǎi)BP的話(huà)好像試劑盒里面沒(méi)有pDONR221載體。具體你還是問(wèn)你們那的Invitrogen公司銷(xiāo)售代理吧，他會(huì)給你建議的

贊一下

回復(fù)此樓

15樓2013-12-05 19:53:26

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

15樓: Originally posted by 傷何處 at 2013-12-05 19:53:26
買(mǎi)TOPO的話(huà)它里面就有TOPO載體了，買(mǎi)BP的話(huà)好像試劑盒里面沒(méi)有pDONR221載體。具體你還是問(wèn)你們那的Invitrogen公司銷(xiāo)售代理吧，他會(huì)給你建議的...

好的謝謝你告訴我這么多

贊一下

回復(fù)此樓

16樓2013-12-05 21:38:54

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fanwq258

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
金幣: 94
帖子: 686
在線(xiàn): 659小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1694785

引用回帖:

再請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題，gateway克隆會(huì)產(chǎn)生移碼突變嗎？用TOPO反應(yīng)的話(huà)，引物設(shè)計(jì)需要注意什么嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

17樓2013-12-05 21:55:47

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

傷何處

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
金幣: 2444.9
帖子: 810
在線(xiàn): 602.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1406557

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

17樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 21:55:47
再請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題，gateway克隆會(huì)產(chǎn)生移碼突變嗎？用TOPO反應(yīng)的話(huà)，引物設(shè)計(jì)需要注意什么嗎？...

TOPO反應(yīng)的話(huà)，只要在正向引物的5'端加CACC就行了吧，不記得有什么特別需要注意的我沒(méi)用過(guò)gateway構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體，正在構(gòu)建啟動(dòng)子+gus的，這個(gè)的話(huà)只要注意gus不發(fā)生移碼就成

贊一下

回復(fù)此樓

18樓2013-12-05 22:01:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

434744419

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 988.8
帖子: 128
在線(xiàn): 27小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 601633

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

14樓: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 18:24:49
請(qǐng)問(wèn)，我現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室就只有g(shù)ateway的表達(dá)載體，其他東西都的買(mǎi)，哪種方法可以最省錢(qián)呢？...

要是topo反應(yīng)的需要買(mǎi)試劑盒，大約4k,以后做LR需要買(mǎi)克隆酶，大約2k多！

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

贊一下

回復(fù)此樓

19樓2013-12-09 20:42:46

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 fanwq258 的主題更新

返回列表

普通表情龍兔虎貓高級(jí)回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4	錦鯉0909 2026-03-17	4/200	2026-03-17 18:21 by 重科小霸王
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +4	zbzihdhd 2026-03-15	5/250	2026-03-17 17:33 by ruiyingmiao
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +11	大米飯！ 2026-03-15	14/700	2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 290求調(diào)劑 +3	p asserby. 2026-03-15	4/200	2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 085600材料與化工 +4	安全上岸！ 2026-03-16	4/200	2026-03-17 14:02 by 勇敢太監(jiān)王公公
[考研] 302求調(diào)劑 +4	小賈同學(xué)123 2026-03-15	8/400	2026-03-17 10:33 by 小賈同學(xué)123
[考研] 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑 +3	zhouzhen654 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 286求調(diào)劑 +3	lemonzzn 2026-03-16	5/250	2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[基金申請(qǐng)] 今年的國(guó)基金是打分制嗎？ 50+3	zhanghaozhu 2026-03-14	3/150	2026-03-16 17:07 by 北京萊茵潤(rùn)色
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4	初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14	5/250	2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大本人本科雙一流 +4	自由的_飛翔 2026-03-13	5/250	2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4	z1z2z3879 2026-03-14	5/250	2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 285 求調(diào)劑資源與環(huán)境一志愿北京化工大學(xué) +3	未名考生 2026-03-10	3/150	2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料專(zhuān)碩288分求調(diào)劑一志愿211 +4	在家想你 2026-03-11	4/200	2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 0703化學(xué)一志愿211 總分320求調(diào)劑 +5	瑪卡巴卡啊哈 2026-03-11	5/250	2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3	周56 2026-03-11	3/150	2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 307求調(diào)劑 +5	超級(jí)伊昂大王 2026-03-12	5/250	2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 314求調(diào)劑 +7	無(wú)懈可擊的巨人 2026-03-12	7/350	2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3	T123 tt 2026-03-12	3/150	2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專(zhuān)碩） +3	xc321 2026-03-12	6/300	2026-03-13 08:45 by xc321

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

» 猜你喜歡

» 搶金幣啦！回帖就可以得到: 查看全部散金貼

» 本帖附件資源列表

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼