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zhaozhibozhi金蟲 (正式寫手)
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[求助]
細菌基因突變體功能補償
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請教一個實驗問題。 最近敲出了Pseudomonas syringe菌株的一個基因，產(chǎn)生了某些表型變化，想做突變體功能補償。 請問是否可以把基因的ORF連到帶有啟動子（如tac promoter）的載體上？如果可以，帶有融合標簽的表達載體pMEKm12可以用嗎？ 或者，需要把基因的ORF連同自身啟動子一塊連到載體上？如果是這樣，有哪些載體可以使用呢? 誠謝�。�！ |
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5樓2013-12-07 20:34:10
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用所謂的native promoter是最好的，既然有人在此菌株中用過這個啟動子做過過表達實驗，說明這是一個強啟動子，強啟動子的特點應(yīng)該是所有時間段或生長階段的強力且持續(xù)的表達，做功能補償應(yīng)該是可以。但是為什么native的更好，是因為native promoter并不一定是個強啟動子，它可能會在不同的時間有不同的表達量，這種情況是和敲掉以前的基因表達基本一致的，基本不會有其他影響；如果你用外源的強啟動子，補償?shù)幕虺掷m(xù)表達，相對于原始的基因表達水平就會有差異，比如在X時期，原始基因是沒有表達的而外源啟動子卻還是一直表達，所以有了差異可能就會有其他影響，native promoter就沒這個問題了。 |
6樓2013-12-08 12:55:06
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7樓2013-12-08 13:10:33
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