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ccchudi銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于碩士階段實(shí)驗(yàn)思路的求助（VLPs的制備） 已有1人參與
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我是做HPV52 L1蛋白的真核表達(dá) 但由于目前尚未有商品化的HPV52 L1抗體 因此只能用HPV 16型的抗體進(jìn)行檢測(cè) 目前國(guó)內(nèi)很多文獻(xiàn)都是用16型的來(lái)做WESTERN BLOT 圖片看上去的確很好看，特異性很好，干干凈凈的目的條帶 但我們之前做HPV 58的VLP用HPV 16抗體檢測(cè)效果并不好，有假陽(yáng)性條帶 HPV52只做過(guò)一次WB，比58情況略好，但依舊沒有文獻(xiàn)的圖片那么好 （文獻(xiàn)圖片好看情有可原，呵呵） 因此有人給我提出建議 讓我用原核表達(dá)目的蛋白片段，做小規(guī)模純化后免疫動(dòng)物獲得抗血清，自己提一些抗體做WB 我隱隱覺得這個(gè)辦法有點(diǎn)問題 用自己基因片段制備的抗體來(lái)檢測(cè)自己制備的抗原，有說(shuō)服力么？假設(shè)我的L1基因序列由于突變等原因?qū)е铝税被岬母淖�，這樣獲得的抗體依舊有可能與抗原結(jié)合，甚至也可能出現(xiàn)WB特異性不好等原因 而且這個(gè)圈子似乎繞的有點(diǎn)大，相關(guān)的工作量和時(shí)間成本也很大 因此想求助大家?guī)蛡�(gè)忙： 1.我這個(gè)原核表達(dá)做的有意義么 2.如何能降低WB非特異性條帶的出現(xiàn)（PS就不用說(shuō)了） 3.我真核表達(dá)出的VLP電鏡下總是形態(tài)不完整，想試試抑肽酶，大家有用過(guò)的么。 |
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銅蟲 (初入文壇)
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