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[交流] 蛋白如何做質(zhì)譜及分析

本人分子生物盲一名，近日想檢驗(yàn)一個(gè)分子量為25KDa的蛋白，但是不知道該如何下手。聽(tīng)那個(gè)老師說(shuō)分子量過(guò)大，要進(jìn)行酶切，這一步如何做呢？我看文獻(xiàn)用的胰蛋白酶啊。如果質(zhì)譜做出來(lái)，是否有什么分析軟件課推薦呢？是應(yīng)該用生物質(zhì)譜還是用液質(zhì)聯(lián)用呢？

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1樓 2013-12-06 16:48:26

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fuyuandj86

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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-07 14:10:06

你可以用LC-MS/MS用trypsin酶切
這個(gè)分子量也可以不用酶切, 直接做MALDI,
ESI理論上也能也能看到峰, 只是會(huì)帶多電荷, 所以看到的大概會(huì)比較亂

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2樓2013-12-07 02:17:26

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3樓2013-12-07 06:12:55

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jurkat.1640

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PAGE電泳，染色，然后交給公司處理了。生工做質(zhì)譜一個(gè)樣品600元。

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5樓2013-12-07 12:52:58

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alicelchf

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6樓2013-12-08 01:31:23

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duncan0319

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2014-01-05 01:36:59

傳統(tǒng)的小分子質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)利用ESI做，原因是小分子質(zhì)合比（m/z）是1.ESI也可以做蛋白是因?yàn)榈鞍椎模╩/z）大于1，所以也可以顯峰

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7樓2013-12-08 13:55:59

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foxhuli

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2樓: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-12-07 02:17:26
你可以用LC-MS/MS用trypsin酶切
這個(gè)分子量也可以不用酶切, 直接做MALDI,
ESI理論上也能也能看到峰, 只是會(huì)帶多電荷, 所以看到的大概會(huì)比較亂

還想問(wèn)一下，我的蛋白剛開(kāi)始是用PBS溶的，2.5mg/kg，做質(zhì)譜不能用磷酸鹽，經(jīng)過(guò)透析袋（沒(méi)用過(guò)）透析去除磷酸鹽，那么就應(yīng)該剩下水了是吧？質(zhì)譜不是要揮發(fā)性溶劑么？那怎么辦啊？

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8樓2013-12-11 09:48:11

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fuyuandj86

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8樓: Originally posted by foxhuli at 2013-12-11 09:48:11
還想問(wèn)一下，我的蛋白剛開(kāi)始是用PBS溶的，2.5mg/kg，做質(zhì)譜不能用磷酸鹽，經(jīng)過(guò)透析袋（沒(méi)用過(guò)）透析去除磷酸鹽，那么就應(yīng)該剩下水了是吧？質(zhì)譜不是要揮發(fā)性溶劑么？那怎么辦��？...

直接做ESI的不知道, 做過(guò)幾次, 不是自己處理的樣品
做MALDI的話,我用ziptip處理除鹽,然后就直接點(diǎn)matrix了
做LC-MS/MS, 最后反正要把trypsin降解后的多肽片斷萃取到acetonitrile和formic acid的水溶液中,然后最后真空抽干

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shasha沙

9樓2013-12-11 10:05:36

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foxhuli

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9樓: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-12-11 10:05:36
直接做ESI的不知道, 做過(guò)幾次, 不是自己處理的樣品
做MALDI的話,我用ziptip處理除鹽,然后就直接點(diǎn)matrix了
做LC-MS/MS, 最后反正要把trypsin降解后的多肽片斷萃取到acetonitrile和formic acid的水溶液中,然后最后 ...

是不是還要把trypsin去掉啊？你那個(gè)降解后的片段如何萃取呢？

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10樓2013-12-12 20:55:58

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shasha沙

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我想問(wèn)一下，多肽片段怎么萃取到乙腈和甲酸的水溶液中？乙腈和甲酸都是溶于水的��？

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11樓2014-01-04 20:21:00

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kaikura

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11樓: Originally posted by shasha沙 at 2014-01-04 20:21:00
我想問(wèn)一下，多肽片段怎么萃取到乙腈和甲酸的水溶液中？乙腈和甲酸都是溶于水的��？...

跑膠，酶解，酶解后萃取

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12樓2014-01-06 17:48:26

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s1523466

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12樓: Originally posted by kaikura at 2014-01-06 17:48:26
跑膠，酶解，酶解后萃取...

你好，我想問(wèn)下，跑膠，酶解，跑膠后是回收膠之后把膠回收然后用胰蛋白酶水解后進(jìn)質(zhì)譜嗎

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13樓2018-12-02 10:47:57

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簡(jiǎn)單回復(fù)

sjmr12214樓

2013-12-07 09:17 回復(fù)

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