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急救！cDNA做模板進(jìn)行PCR克隆出的質(zhì)粒測(cè)出了一段內(nèi)含子
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| 最近在用擬南芥cDNA模板克隆一個(gè)基因，基因長(zhǎng)2.3Kb.用gateway方法和topo克隆同時(shí)篩選出了陽(yáng)性菌落，接下來(lái)分段測(cè)序。這時(shí)問(wèn)題出來(lái)了，在兩種方法克隆出來(lái)的質(zhì)粒中均測(cè)出了一段長(zhǎng)32堿基的內(nèi)含子。問(wèn)題是兩次方法用的是不同cDNA模板，所以我覺(jué)得可以排除模板的問(wèn)題了吧�，F(xiàn)在的問(wèn)題就是想破腦袋也不明白為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況。各位高手，牛人，麻煩幫忙分析一下吧。不勝感激�。。�！ |
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zhaolf
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
珉珉的小辮: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-12-11 09:41:01
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| 這種情況我遇到過(guò)，剛開(kāi)始以為是splicing variant，后來(lái)發(fā)現(xiàn)插入的intron會(huì)導(dǎo)致蛋白翻譯很快終止，于是我就另挑了菌落測(cè)序，就找到正確的不帶intron的了。所以樓主還是再挑幾個(gè)克隆測(cè)序吧。至于為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況，我也不知道，O(∩_∩)O哈哈~ |
2樓2013-12-11 07:46:26
3樓2013-12-11 09:40:43
zhaolf
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4樓2013-12-11 13:06:42
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5樓2013-12-11 22:08:37
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