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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 免疫組化
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免疫組化 已有1人參與
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| 有人做過大鼠腎臟VDR的免疫組化和大鼠肝臟IL-3的免疫組化嗎，都是石蠟切片的，有沒有具體的操作方法，需要注意哪些方面，第一次做，不太了解。謝謝！ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
gyesang: 金幣+3, 鼓勵交流！ 2013-12-29 16:11:05
gyesang: 金幣+3, 鼓勵交流！ 2013-12-29 16:11:05
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一般來講，如果是石蠟切片， 1.在二甲苯和梯度酒精溶液里脫蠟復水 2、PBS洗滌 3、用pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液95℃水浴15分鐘，靜置冷卻至室溫。 4、PBS洗滌，滴加過氧化物酶阻斷劑，室溫孵育10分鐘。PBS洗滌3次 5、除去PBS液，滴加封閉血清，室溫孵育10分鐘 6、除去血清，滴加一抗，4攝氏度過夜 7、PBS洗滌，滴加生物素標記的二抗，室溫孵育30分鐘。PBS洗滌 8、除去PBS液，滴加鏈霉素抗生物素過氧化物酶作用液，室溫孵育10分鐘，PBS洗滌 9、除去PBS，滴加DAB顯色，蒸餾水終止 10、自來水沖洗，復染或不復染，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片 這是我們實驗室免疫組化的步驟，二抗的選擇看你用什么樣的顯色液，若是做熒光，封片用抗淬滅的封片劑，推薦daco，一抗孵育完后要充分洗滌。還有，一抗的適用濃度要摸索 |
2樓2013-12-29 15:35:34
，謝謝了 3樓2014-01-02 15:45:02
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