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pUC 19 plasmid作對照的原理及操作
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我的PCR產(chǎn)物要做克隆，買了Takara的感受態(tài)，里面有一管pUC 19 plasmid，查了說明書說是做對照用的，但沒寫具體怎么做，對它的原理也不清楚。 所以請各位大蝦指點一下，最好從pUC 19 plasmid的結(jié)構(gòu)上給我說明一下：1、它做對照的原理；2、起到什么作用；3、具體如何操作（我的連接液體系是：2.5ul solution I+2ul 膠回收DNA+0.5ul T-vector，加到50ul感受態(tài)細(xì)胞中）。 本來就是做分子的新手，現(xiàn)又遇到各種問題，做克隆也是完全自己查資料摸索著做，沒有師兄師姐帶的菜鳥傷不起�。� 求高手不吝指教！ |
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檸檬可樂星: 金幣+5 2013-12-14 17:55:58
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"買了Takara的感受態(tài)，里面有一管pUC 19 plasmid " 1、它做對照的原理； pUC 19 plasmid是附在感受態(tài)里面的，是讓你用來測試你買的感受態(tài)的效率的，質(zhì)粒有一定的濃度，你可以取一定量進行轉(zhuǎn)化，然后根據(jù)質(zhì)粒的量和長出的菌落數(shù)算出感受態(tài)的效率 X cfu。 2、起到什么作用； 就是轉(zhuǎn)化的陽性對照（不是連接的陽性對照）作用，檢測感受態(tài)的效率，平板的抗性，轉(zhuǎn)化的過程等等 3、具體如何操作（我的連接液體系是：2.5ul solution I+2ul 膠回收DNA+0.5ul T-vector，加到50ul感受態(tài)細(xì)胞中） pUC 19跟你做連接沒有關(guān)系 |
2樓2013-12-13 15:18:13
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