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[交流] HRP催化底物，請(qǐng)問(wèn)只有H2O2，沒(méi)有底物？

HRP催化底物，請(qǐng)問(wèn)只有H2O2，沒(méi)有底物時(shí)，HRP能分解H2O2嗎？

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1樓 2013-12-17 11:21:59

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cicelyzh

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H2O2就是底物。HRP是horseradish peroxidase的簡(jiǎn)稱，是過(guò)氧化物酶，催化H2O2分解成水和氧氣。

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2樓2013-12-17 12:58:22

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HRP是雙底物，除雙氧水外其他底物很多，west常用的是魯米諾，測(cè)活用的愈創(chuàng)木酚，Vc等等。一般都是顯色法或熒光法。分解雙氧水的是過(guò)氧化氫酶。以雙氧水為氧化劑的是過(guò)氧化物酶。

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3樓2013-12-17 14:40:49

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3樓: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-17 14:40:49
HRP是雙底物，除雙氧水外其他底物很多，west常用的是魯米諾，測(cè)活用的愈創(chuàng)木酚，Vc等等。一般都是顯色法或熒光法。分解雙氧水的是過(guò)氧化氫酶。以雙氧水為氧化劑的是過(guò)氧化物酶。

那么請(qǐng)問(wèn)HRP能否分解雙氧水呢？

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4樓2013-12-17 14:56:13

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4樓: Originally posted by xiaoyuehua at 2013-12-17 14:56:13
那么請(qǐng)問(wèn)HRP能否分解雙氧水呢？...

說(shuō)不好，推測(cè)在沒(méi)有底物的情況下，單純加雙氧水和HRP，HRP可能會(huì)被氧化而催化中心分解最終失活，而這一過(guò)程中雙氧水含量下降。至于是否有過(guò)氧化氫酶活性不好說(shuō)，得查文獻(xiàn)。

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5樓2013-12-17 15:51:02

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xiaoyuehua: 金幣+1 2013-12-18 18:01:36

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魯米諾在氧的作用下發(fā)出熒光，用于western信號(hào)檢測(cè)，與HRP沒(méi)有關(guān)系，其它酶，只要能夠產(chǎn)生氧的，都可以讓魯米諾發(fā)熒光。至于HRP的作用是催化雙氧水產(chǎn)生氧，所以HRP的底物是雙氧水。

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6樓2013-12-18 12:08:47

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xiaoyuehua: 金幣+1 2013-12-19 21:12:27

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6樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-18 12:08:47
魯米諾在氧的作用下發(fā)出熒光，用于western信號(hào)檢測(cè)，與HRP沒(méi)有關(guān)系，其它酶，只要能夠產(chǎn)生氧的，都可以讓魯米諾發(fā)熒光。至于HRP的作用是催化雙氧水產(chǎn)生氧，所以HRP的底物是雙氧水。...

按你的說(shuō)法，魯米諾發(fā)光不應(yīng)加雙氧水，也不需要HRP標(biāo)的二抗，因?yàn)榭諝庵械难鯕馔瑯訒?huì)使魯米諾發(fā)光。HRP是辣根過(guò)氧化物酶，不是過(guò)氧化氫酶，是以雙氧水底物催化氧化反應(yīng)的。而直接分解雙氧水的是過(guò)氧化氫酶（catalase）。

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7樓2013-12-18 19:38:53

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xiaoyuehua: 金幣+1 2013-12-19 21:12:24

引用回帖:

7樓: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-18 19:38:53
按你的說(shuō)法，魯米諾發(fā)光不應(yīng)加雙氧水，也不需要HRP標(biāo)的二抗，因?yàn)榭諝庵械难鯕馔瑯訒?huì)使魯米諾發(fā)光。HRP是辣根過(guò)氧化物酶，不是過(guò)氧化氫酶，是以雙氧水底物催化氧化反應(yīng)的。而直接分解雙氧水的是過(guò)氧化氫酶（catala ...

實(shí)際上，空氣里的氧氣濃度在水溶液里不高，經(jīng)HRP催化雙氧水分解后溶液里的氧氣的濃度迅速上升。而室溫下魯米諾會(huì)緩慢被空氣中的氧氣破壞而逐漸失效，所以試劑保存在4°C并避光。

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8樓2013-12-19 09:46:50

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