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lm334723460銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
PCR引物 已有5人參與
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| 我從文獻(xiàn)上找了一對(duì)引物,現(xiàn)在要試擴(kuò)增的程序,退火溫度等。我想問下各位是怎么做的。 |
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梯度PCR [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |

銀蟲 (小有名氣)
金蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
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你要“退火溫度等”,你是要摸索PCR的最佳實(shí)驗(yàn)條件嗎? 如果是的話: 1.引物Tm值你知道了吧,你使用的taq酶說明書上有建議的退火溫度(不同廠家Taq酶的擴(kuò)增能力、擴(kuò)增速度、與模板的親和能力各有不同,所以同一模板不同廠家的酶PCR的退火溫度、延伸時(shí)間會(huì)有差異),你瀏覽下所使用的Taq酶說明書建議的退火溫度(擴(kuò)增能力強(qiáng)的Taq酶退火溫度為Tm值低1-2度,擴(kuò)增能力差點(diǎn)的為Tm值低5度 等等) 2.TOUCHDOWN摸索退火溫度 3.預(yù)變性的溫度、時(shí)間;變性的溫度、時(shí)間;延伸的溫度、時(shí)間;這些Taq酶說明書上會(huì)有說明,不同牌子的酶會(huì)有差異 4.順便說一句:沒有一成不變的退火溫度或者延伸時(shí)間等等,PCR的條件不僅和引物、模板關(guān)系很大,而且與所使用的Taq酶的特點(diǎn)也有很大關(guān)系,而很多同學(xué)會(huì)忽略了所使用的Taq酶的特點(diǎn) |
銀蟲 (小有名氣)
金蟲 (正式寫手)
學(xué)術(shù)江湖混子

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