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[求助] 請(qǐng)教，細(xì)胞染色的問題已有2人參與

不知道該不該發(fā)到這里，本人是做高分子的，材料表征需要做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，剛剛開始，我們用的染料主要是DAPI和A488，都是比較常見的，但實(shí)際操作起來沒有想象的順利，有些問題想請(qǐng)教一下：

1 DAPI 如果沒有和細(xì)胞核內(nèi)的DNA結(jié)合會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色熒光么？我們經(jīng)常在樣品上看到一些藍(lán)色的點(diǎn)，感覺像是染料殘余，而不是細(xì)胞核，懷疑是不是自己沒洗干凈。
2 A488 染的到底是什么？為什么同樣的操作步驟同樣的染料，有時(shí)候能染上有時(shí)候就染不上呢？與什么因素有關(guān)？

謝謝！

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1樓 2013-12-19 02:26:14

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10樓: Originally posted by sapeter at 2013-12-20 04:41:33
是的，通透過的。就是看到一些藍(lán)色的點(diǎn)，不知道染料殘留會(huì)不會(huì)產(chǎn)生這樣的效果，還是細(xì)胞核的效果。但是覺得大小不均勻，而且形狀也是多邊形的。...

這是我們?nèi)镜墓潭ㄍㄍ钢蟮募?xì)胞

DAPI.jpg

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11樓2013-12-20 15:31:58

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12樓: Originally posted by czcpudai at 2013-12-22 07:01:20
您好，我最近打算做這個(gè)熒光染色的實(shí)驗(yàn)，但是不知道相關(guān)的步驟，我看到您的帖子發(fā)的照片，做的挺不錯(cuò)的，能不能給指點(diǎn)一下，這個(gè)實(shí)驗(yàn)的具體步驟是怎么樣的?多謝了！...

爬片的細(xì)胞用PBS輕輕洗兩三遍，4%多聚甲醛固定10min，PBST洗3遍，用1%的triton X-100通透10min，PBST洗三遍，再用1：:10000的DAPI染色10min，再用PBST洗干凈就好了

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13樓2013-12-22 16:13:51

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-12-19 09:16:43

a488染料我沒用過。DAPI染色后，必須充分振搖沖洗，否則是很容易殘留。DAPI染色最理想的就是細(xì)胞核被染成藍(lán)色的小亮點(diǎn)。

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2樓2013-12-19 08:54:01

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-12-19 09:16:47

DAPI染死細(xì)胞的話，很好染�；罴�(xì)胞的話，會(huì)有殘留

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3樓2013-12-19 08:57:53

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2樓: Originally posted by daibingling at 2013-12-19 08:54:01
a488染料我沒用過。DAPI染色后，必須充分振搖沖洗，否則是很容易殘留。DAPI染色最理想的就是細(xì)胞核被染成藍(lán)色的小亮點(diǎn)。

那殘留的DAPI會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光么？DAPI是不是只有與細(xì)胞核結(jié)合后才會(huì)發(fā)出熒光？還是本身也有熒光？

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4樓2013-12-20 04:25:18

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3樓: Originally posted by aoda123 at 2013-12-19 08:57:53
DAPI染死細(xì)胞的話，很好染�；罴�(xì)胞的話，會(huì)有殘留

染料在細(xì)胞外的殘留與活死有關(guān)系么？我染的都是用甲醛固定的細(xì)胞，死透了的。

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5樓2013-12-20 04:37:07

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3樓: Originally posted by aoda123 at 2013-12-19 08:57:53
DAPI染死細(xì)胞的話，很好染。活細(xì)胞的話，會(huì)有殘留

染料在細(xì)胞外的殘留與活死有關(guān)系么？我染的都是用甲醛固定的細(xì)胞，死透了的。

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6樓2013-12-20 04:37:52

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4樓: Originally posted by sapeter at 2013-12-20 04:25:18
那殘留的DAPI會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光么？DAPI是不是只有與細(xì)胞核結(jié)合后才會(huì)發(fā)出熒光？還是本身也有熒光？...

殘留的會(huì)看見一片藍(lán)色

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7樓2013-12-20 08:59:31

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5樓: Originally posted by sapeter at 2013-12-19 22:37:07
染料在細(xì)胞外的殘留與活死有關(guān)系么？我染的都是用甲醛固定的細(xì)胞，死透了的。...

如果用多聚甲醛固定并通透以后，DAPI稀釋（1:10000）常溫染色5min就能染得很好

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8樓2013-12-20 09:32:56

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5樓: Originally posted by sapeter at 2013-12-19 22:37:07
染料在細(xì)胞外的殘留與活死有關(guān)系么？我染的都是用甲醛固定的細(xì)胞，死透了的。...

用0.1%triton X-100通透5-10min

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9樓2013-12-20 09:42:56

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9樓: Originally posted by aoda123 at 2013-12-20 09:42:56
用0.1%triton X-100通透5-10min...

是的，通透過的。就是看到一些藍(lán)色的點(diǎn)，不知道染料殘留會(huì)不會(huì)產(chǎn)生這樣的效果，還是細(xì)胞核的效果。但是覺得大小不均勻，而且形狀也是多邊形的。

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