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一葦杭之xmc銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
考染脫色總是脫過頭，什么原因啊？ 已有1人參與
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最近跑完sds-page后做考染總是效果非常不理想。 我的染色液配方是：甲醇500mL，乙酸100mL，水400mL。R-250，2.5g。 脫色液是以上溶液不加R-250。 甲醇乙酸溶液我也是前幾天剛配。 我一般是染色液會水浴到70℃，然后染色2-3h。之后過夜脫色。我昨天都沒有換液，就加了一次脫色液搖過夜了，早上來看，白花花的，連maker都沒有。真是奇怪了。 求各位有經(jīng)驗的大神指點！不甚感激！ ps：我用的丙烯酰胺是碧云天買的30%（29：1），以前用的是生工的30%（37.5:1），不知道這個有沒有影響。 [ Last edited by 一葦杭之xmc on 2013-12-19 at 09:49 ] |
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cicelyzh
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【答案】應助回帖
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甲醇也乙酸的濃度太高了。通常脫色液里的乙酸是7%，甲醇的濃度可以不同。高一些脫色快，低的話脫色慢。超過5%的話最好不要過夜。一般可以用高濃度甲醇脫色液（40-50%）5分鐘兩次，換成稍低濃度的（25%），一般要脫幾個小時。如果需要過夜，換成含甲醇5%的脫色液或者干脆換成水，第二天來了再繼續(xù)脫色。 丙烯酰胺stock的比例直接影響交聯(lián)度，對膠的孔徑影響很大。通常分蛋白的是37.5:1的。29:1的孔徑較小，用于核酸或者大分子蛋白復合物。 |
2樓2013-12-19 10:00:12
一葦杭之xmc
銀蟲 (初入文壇)
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3樓2013-12-19 10:55:53
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