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藍(lán)白斑篩選困境啦
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我在做藍(lán)白斑篩選,按takara的說(shuō)明書(shū)做的,結(jié)果沒(méi)有藍(lán)斑,只有模糊一片的白斑。是什么原因呢?
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2樓
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朱多龍
at 2013-12-25 18:32:15
涂得菌體太多了,要少涂一些復(fù)蘇的菌液。是不是X-gal 有問(wèn)題,還是誘導(dǎo)IPTG濃度太低?還有就是IPTG是在你倒平板的時(shí)候加的嗎?是否溫度過(guò)高?建議IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,這樣比較省事,而且誘導(dǎo) ...
其實(shí)只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是復(fù)蘇前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。
2013-12-25 20:56:55
涂得菌體太多了,要少涂一些復(fù)蘇的菌液。是不是X-gal 有問(wèn)題,還是誘導(dǎo)IPTG濃度太低?還有就是IPTG是在你倒平板的時(shí)候加的嗎?是否溫度過(guò)高?建議IPTG和X-gal 最后可以喝菌液混好后直接涂板,這樣比較省事,而且誘導(dǎo)效果會(huì)比較好。
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2013-12-25 20:57:04
菌液太多 嘗試減少到50ul + 5ul 連接產(chǎn)物
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4樓
2013-12-25 20:24:57
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3樓
:
Originally posted by
西區(qū)五號(hào)樓
at 2013-12-25 19:04:58
其實(shí)只涂了100ul菌液。IPTG和X-gal是復(fù)蘇前涂的,IPTG(20mg/ml)涂了40ul,X-gal(20mg/ml)也是40ul。...
正常這個(gè)濃度比例不會(huì)有問(wèn)題的啊!考慮考慮X-gal 是否有問(wèn)題,見(jiàn)光易失效。復(fù)蘇前涂得是否避光。還有可以那其他的質(zhì)粒做一下重復(fù)啊。 西區(qū)五號(hào)樓?在天津?我也在西區(qū)四號(hào)樓。
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2013-12-25 20:49:06
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