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鬼羽帝魂木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
【求助】關(guān)于NEB公司的Fse I酶 酶切的疑惑 已有2人參與
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最近用NEB公司的FseI酶進(jìn)行酶切，按照說(shuō)明書(shū)上體系如下： 酶 1ul 10Xbuffer 5ul DNA 1ug 水 X 總體系為50ul 反應(yīng)條件37度。5-15min或者過(guò)夜。 但是我按這個(gè)體系 條件一直切不完全載體。把體系縮至20ul后，15h還是切不完全。 現(xiàn)在處在即將崩潰的邊緣，，請(qǐng)各位蟲(chóng)友幫忙，有用過(guò)這個(gè)酶的嗎？體系是多少呀？ |
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鬼羽帝魂
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5樓2013-12-30 15:44:03
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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1. 一般酶切做2-3小時(shí)比較合適，除非是快切酶，即使是快切酶有時(shí)候也需要稍微延長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。 2. 此酶穩(wěn)定性差，根據(jù)NEB建議儲(chǔ)存在-70°C而非-20°C。 3. DNA里如果含鹽量高會(huì)嚴(yán)重抑制酶活性，建議不要把反應(yīng)體系的體積縮得太小。質(zhì)�；蛘逥NA片段的濃度盡量高一些，以減少純化過(guò)程中的殘留鹽對(duì)酶切的抑制。 |
2樓2013-12-27 16:15:58
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3樓2013-12-27 16:43:11
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4樓2013-12-28 00:10:25
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