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seaka新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌微量凝集試驗(yàn)的抗原制備 已有1人參與
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各位大俠，新年好啊~最近我想用微量凝集試驗(yàn)來進(jìn)行大腸桿菌抗體水平檢測（具體見下），在抗原制備方面才出現(xiàn)問題了。第一批抗原制備出來很好用的 ，但是已經(jīng)確定是陽性的血清，換了后面做的抗原就都沒辦法在凝集了，全都是第一孔就沉積下來，求助啊~ 1、抗原制備：用攻毒的幾株大腸桿菌培養(yǎng)出液，3000rpm/min，15min離心，棄上清，濃縮一下，加入甲醛使其終濃度為0.5%，37℃，滅活24h，后用滅菌生理鹽水反復(fù)洗滌，調(diào)成濃縮菌液(約2×10^9CFU/mL)。4 ℃保存?zhèn)溆谩?br /> 2、微量凝集：在 “V”型微量板上進(jìn)行，用生理鹽水倍比稀釋被檢樣品，并加入微量板相應(yīng)的孔中 (設(shè)陽性對照)，再往每孔中加入等量抗原(0.05 ml)，置37 ℃作用4h，按50% 終點(diǎn)法判定結(jié)果，以(log2)表示，同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清對照。 這應(yīng)該是非常簡單的實(shí)驗(yàn)了，可是抗原老是沒有辦法被凝集。曾經(jīng)懷疑滅活用的甲醛殘留會(huì)有影響，試著洗滌2次以后，還是一樣的。除了求助找出問題的原因之外，我還想知道甲醛到底對抗原的影響有多大，滅活時(shí)間過長會(huì)不會(huì)也將抗原完全破壞了，使其一點(diǎn)效果也沒有，或是殘留甲醛附著在抗原上，導(dǎo)致被檢測的抗體失活，或者影響抗原抗體的結(jié)合？ 新年第一個(gè)愿望就是能把這個(gè)問題解決了，希望各位高手幫幫忙，先謝過了！ |
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2樓2014-11-25 18:26:37
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