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auditt新蟲 (初入文壇)
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[求助]
斑馬魚原位雜交用Fast Red染色有什么方法降低背景顏色？ 已有3人參與
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之前用的染料是羅氏的BM Purple，一直沒問題，現(xiàn)在需要另一種顏色，于是找到羅氏的Fast Red想染紅色，羅氏的protocol很簡(jiǎn)單只寫說用0.1M Tris-HCl, pH 8.2 溶解一片F(xiàn)ast Red tablet，我做出來背景顏色是很亮的黃色，上色速度也比探針快很多，但做對(duì)照組的另一個(gè)探針顏色就很明顯，我在網(wǎng)上看別人的實(shí)驗(yàn)圖片都沒有什么背景色。 為降低背景色我在加antibody之后用MABT洗8次，又放在4°C過夜，染色過程提高溫度也沒有用（之前用BM Purple染色放在60°C可以加快上色速度）。 加antibody處理從3小時(shí)減到2小時(shí)也沒有用。 staining buffer 是 0.1M Tris-HCl, pH要求8.2，實(shí)驗(yàn)室有1M，pH 8.0 的，我直接稀釋10倍用了，第二次試驗(yàn)稀釋后加了0.1% tween20，都沒什么改善， 0.1M Tris 到底有什么作用啊？因?yàn)槭蔷彌_液，稀釋過程pH應(yīng)該不會(huì)有很大改變吧？如果增加濃度，比如用0.5M 或者1M 的 Tris-HCl 會(huì)怎么樣？ 最重要是想問還有什么方法可以減少背景色，但又不影響探針上色？或者能讓探針上色速度加快？ 非常感謝！ |
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