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1樓 2014-01-08 23:12:56

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cicelyzh

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-01-09 08:51:59
LYSH1103: 金幣+1, ★★★很有幫助, 我金幣太少了，不夠分啊，因?yàn)槭切孪x 。。吱吱 2014-01-14 09:46:48

可能是模板用量不正確。而且樣品里含有RNA，可能影響引物與模板的結(jié)合。

2樓2014-01-09 02:14:10

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夢若冰凌80

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LYSH1103: 金幣+1, 我的金幣不夠啦，，新蟲窮啊。。。嘎嘎 2014-01-14 09:47:21

膠和電泳的問題，之前遇到過，一個(gè)是膠做的不合適，一個(gè)電泳儀設(shè)置的有問題，前者的可能性比較大

4樓2014-01-09 10:39:21

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cicelyzh

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3樓: Originally posted by LYSH1103 at 2014-01-09 08:07:43
我測了我稀釋后DNA的濃度，是20-80ng不等。50微升用1微升。...

因?yàn)闃悠防镉蠷NA和其它雜質(zhì)，可能需要適當(dāng)增加鎂離子濃度或者降低退火溫度。

6樓2014-01-09 12:24:13

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ruikun

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請問樓主問題解決了嗎？我最近也出現(xiàn)了這樣的問題，很需要指點(diǎn)啊!!

7樓2014-01-09 16:57:28

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yuanbeauty

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LYSH1103: 金幣+1, ★★★很有幫助, 金幣不夠分啊。。新蟲。。吱吱 2014-01-14 09:48:29

DNA電泳圖是稀釋后的嗎？另外，前幾次能P出來，后又P不出來，這幾次用的是相同的DNA模板嗎？

DNA濃度過高，會(huì)沒有產(chǎn)物的。這是我們的經(jīng)驗(yàn)，供參考。

8樓2014-01-09 18:13:30

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-09 02:14:10
可能是模板用量不正確。而且樣品里含有RNA，可能影響引物與模板的結(jié)合。

我測了我稀釋后DNA的濃度，是20-80ng不等。50微升用1微升。

3樓2014-01-09 08:07:43

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這個(gè)現(xiàn)象持續(xù)20天了。我做1.0的膠，電泳儀大家都用一個(gè)，別人能跑出來啊！PCR儀我也換著用過了。還是一樣。。。我就有點(diǎn)崩潰啊。。。

5樓2014-01-09 11:37:07

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6樓: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-09 12:24:13
因?yàn)闃悠防镉蠷NA和其它雜質(zhì)，可能需要適當(dāng)增加鎂離子濃度或者降低退火溫度。...

我在提取DNA的時(shí)候已經(jīng)用過RNase A .其他雜質(zhì)這個(gè)就。。。難弄啦。。。。我用的是降落式PCR程序，55-65度，還要再低點(diǎn)嗎？出現(xiàn)問題后我也試過45-55度和50-60度。酶有結(jié)果啊。鎂離子這個(gè)我倒是沒有提高。因?yàn)槲矣X得體系沒有問題。之前很好啊。對了，我也懷疑過DNA質(zhì)量，我也新提取了DNA，還是一個(gè)樣子。。。

9樓2014-01-11 20:42:08

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8樓: Originally posted by yuanbeauty at 2014-01-09 18:13:30
DNA電泳圖是稀釋后的嗎？另外，前幾次能P出來，后又P不出來，這幾次用的是相同的DNA模板嗎？

DNA濃度過高，會(huì)沒有產(chǎn)物的。這是我們的經(jīng)驗(yàn)，供參考。

DNA 的圖是原樣品的。是的用的相同的DNA ,后來又新提取了DNA，還是相同的效果。就很崩潰。所以請教給位大神啊。。。