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shihongxi001新蟲 (初入文壇)
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[求助]
Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J)抗體庫
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有誰用過或了解 Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J) 抗體庫？ 此抗體庫使用前要求完成說明書上的預實驗，并篩選的陽性率要達到50%以上。 隨庫附帶兩種噬菌體（保存于大腸桿菌TG1Tr菌種中），即陰性噬菌體13CG2（抗BSA，應該是用BSA篩庫得到的噬菌體）和陽性噬菌體anti-ubi（抗牛泛素，應該是用牛泛素篩庫得到的噬菌體）。 預實驗內(nèi)容為： 1、用牛泛素包被ELISA96孔板， 2、PBS洗后，加 陽性：陰性=1:100 的噬菌體， 3、PBS洗后，胰酶洗脫后梯度稀釋并涂布到TYE培養(yǎng)基（Amp抗性）的平板上，37℃過夜培養(yǎng)。 4、挑單克隆分別到96孔細胞培養(yǎng)板上，接下來就是培養(yǎng)，最后離心，取上清（含噬菌體）用于ELISA（還是牛泛素包板）檢測。 要求結(jié)果陽性率大于50%，即能從陽性：陰性=1:100的混合噬菌體中篩出50%以上的陽性噬菌體。 問題就出現(xiàn)在此步，我們得到的結(jié)果陽性率不到50%，考慮到牛泛素太貴，但BSA較便宜，所以將兩種噬菌體反過來用，即13CG2（抗BSA）做陽性噬菌體，同時用BSA包板（代替牛泛素），試了幾次陽性率仍然不高，最重要的是有時候ELISA完全不顯色，即便用BSA包板，直接加事先制備好的陽性噬菌體進行ELISA，也不顯色，不知哪步出了問題。 |
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2014-01-24 10:52:56, 80.5 K
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