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我是傳奇456金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
國(guó)外郵寄回來(lái)的突變型擬南芥的種子長(zhǎng)不出來(lái)，求助！ 已有2人參與
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用MS固體培養(yǎng)基培育（滅菌前調(diào)ph至5.8），種子消毒后加入培養(yǎng)基中，封口，4℃春化3天，然后培養(yǎng)條件為溫度 23℃/18℃，光/暗周期 16/8h。 結(jié)果同樣條件下的野生型擬南芥發(fā)芽率約80%，而此突變型擬南芥發(fā)芽率為0。 難道是國(guó)外郵寄的過(guò)程中有什么措施使得擬南芥種子失活了？ 特來(lái)求助！  |
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chiden
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【答案】應(yīng)助回帖
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首先， 如果是陳年的種子確實(shí)有很大可能發(fā)芽率本身就很低，你用野生型發(fā)芽率做對(duì)照，那么這個(gè)是同一時(shí)間收獲的種子么。 其次就是你這個(gè)突變型擬南芥是否本身對(duì)出芽就有影響？你也沒(méi)有具體提到這個(gè)。 第三，消毒是怎樣消毒的？擬南芥的種子消毒有很多種方式，不同時(shí)間收獲的種子，或者-20°保存過(guò)的種子在發(fā)芽的時(shí)候我們會(huì)采用不一樣的消毒方式，這個(gè)跟個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)也有一定的關(guān)系，但是無(wú)論哪種一般而言差別并不的很大。 第四，4°春化的時(shí)間你可以再縮短一點(diǎn)，兩天也可以，這個(gè)僅供參考你試試 第五，將培養(yǎng)間改為1/2 MS培養(yǎng)間呢，注意在萌發(fā)的過(guò)程中不要使得培養(yǎng)間水汽過(guò)重，盡量保持無(wú)明顯水滴，不要太濕也是有影響的 以上是我播種擬南芥時(shí)的一些經(jīng)驗(yàn)，希望對(duì)你有幫助吧 |
3樓2014-02-09 14:06:12
lvbobo823
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5樓2014-02-09 15:42:51
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-02-10 16:52:14
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建議： 1. 培養(yǎng)基播種：消毒方式改為75%酒精洗滌8min，在洗滌過(guò)程中置于37°搖床，轉(zhuǎn)速約180rpm，取出后dd水洗3次~5次（超凈工作臺(tái)內(nèi)操作）。將種子用槍頭（滅菌消毒的剪掉部分尖端的槍頭）點(diǎn)在培養(yǎng)基上，務(wù)必將種子帶進(jìn)去的水在超凈工作臺(tái)內(nèi)吹干后封口。之后4°春化處理。 2. 一般不建議先春化再播種，春化后的種子在消毒的過(guò)程更容易失活。 3. 土壤播種可以嘗試，但并不一定就說(shuō)發(fā)芽率會(huì)更高。取約20-30顆足以。土壤要求不能過(guò)于干燥，但也不能水過(guò)量，自己看著辦；加入的蛭石最好用小塊是蛭石。像有的實(shí)驗(yàn)室中玉米用的蛭石，對(duì)于擬南芥而言就有些過(guò)了。 |
6樓2014-02-09 15:58:20
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