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zdfang83木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請(qǐng)問GST pull-down可以釣取細(xì)胞裂解物中的脂質(zhì)嗎？
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最近對(duì)細(xì)胞膜的表面受體非常感興趣，所以在看GST pull-down技術(shù)，想深入了解一下，就想到了下面這一連串的問題。 第一，如題，GST pull-down可以釣取細(xì)胞裂解物中的脂質(zhì)嗎？因?yàn)槲墨I(xiàn)中介紹蛋白質(zhì)-脂質(zhì)互作方法中有一種脂質(zhì)親和法和GST pull-down的原理一致，只不過是反過來了，把脂質(zhì)與瓊脂糖樹脂取代了GST融合蛋白與瓊脂糖樹脂結(jié)合而已，既然如此，那就應(yīng)該是可行的吧? 第二，細(xì)胞裂解物中的蛋白有親水的也有疏水的，那么都能釣取出來嗎？怎么樣的反應(yīng)條件才能保證無論目的蛋白是親水的還是疏水的都能與誘餌蛋白結(jié)合？ 第三，細(xì)胞的表面受體一定是蛋白嗎？我看文獻(xiàn)中有的蛋白的受體是鞘磷脂呢？細(xì)胞膜成分挺復(fù)雜的，如果受體是脂質(zhì)，或者說如果與誘餌蛋白互作的是脂質(zhì)，那么什么樣的條件下被誘餌蛋白釣出來的可能性才能最大？怎么樣裂解細(xì)胞才能保證無論與誘餌蛋白互作的是親水的蛋白還是疏水蛋白亦或者是脂質(zhì)都能保存下來且有最大的機(jī)會(huì)與誘餌蛋白互作？ 才初步了解這個(gè)技術(shù)，希望有經(jīng)驗(yàn)或者了解較多的人能夠指點(diǎn)一下，也可以私信交流。  |
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