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lywinan捐助貴賓 (職業(yè)作家)
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[求助]
色氨酸合成菌株改造中哪些基因與產(chǎn)量正相關(guān)？ 已有1人參與
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4樓2014-02-17 16:22:31
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2樓2014-02-17 16:19:14
yipan 
銅蟲 (職業(yè)作家)
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- 專業(yè): 整合生物學
【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
lywinan: 金幣+30, ★★★很有幫助, 非常感謝，把一個點講得很詳細~代謝是一條通路，其中有很多相關(guān)基因，希望能多介紹幾個 2014-02-17 17:23:13
感謝參與，應助指數(shù) +1
lywinan: 金幣+30, ★★★很有幫助, 非常感謝，把一個點講得很詳細~代謝是一條通路，其中有很多相關(guān)基因，希望能多介紹幾個 2014-02-17 17:23:13
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由于色氨酸操縱子的調(diào)控作用，自然界不可能存在高產(chǎn)Trp菌株，為了獲得高產(chǎn)Trp菌株，就必須對色氨酸操縱子進行改造，解除其調(diào)節(jié)作用。早期的研究策略主要依靠傳統(tǒng)誘變方法，經(jīng)過長期努力，獲得了一些有價值的研究結(jié)果，如獲得了TrpR - 菌株，通過缺失某些片斷解除了弱化作用，得到了一些抗反饋抑制的酶。許多Trp生產(chǎn)菌株都是通過隨機的誘變技術(shù)篩選得到的，如王健等通過硫酸二乙酯誘變，Trp 類似物篩選等方法從谷氨酸棒桿菌中培育出一株trp 高產(chǎn)菌株，搖瓶發(fā)酵64 h，產(chǎn)trp達到7. 28 g·L - 1。 傳統(tǒng)誘變的方法盡管有效，但其缺陷點也是顯而易見的，如工作量大，效率低，突變株的菌體生長、對環(huán)境的耐受性以及遺傳穩(wěn)定性等都比野生型菌株差等�；蚬こ碳夹g(shù)的建立和發(fā)展對色氨酸操縱子改造提供了新的技術(shù)平臺。1979年Tribe等人采用DNA重組技術(shù)對大腸桿菌進行改造，擴增trp 操縱子,發(fā)酵12 h，產(chǎn)酸1 g·L - 1，產(chǎn)酸量盡管不是很高，但是其意義卻十分重大，由此開創(chuàng)了基因工程技術(shù)在Trp生物合成應用的先河。隨后，Aiba等將帶有色氨酸操縱子的質(zhì)粒引入大腸桿菌，發(fā)酵27 h，并補充鄰氨基苯甲酸，得到trp 6. 2 g·L - 1。Ikeda等通過構(gòu)建穩(wěn)定質(zhì)粒，擴增分支途徑限速酶并改造中心代謝途徑，獲得產(chǎn)Trp 達58 mg ·L - 1 的菌株。除了擴增表達操縱子基因，對其進行理性設(shè)計和改造也開始引起關(guān)注。已知酶分子某些特殊位點突變可以導致對反饋抑制作用敏感性下降，因此可以考慮利用基因工程技術(shù)對色氨酸操縱子結(jié)構(gòu)基因進行理性改造降低其對反饋抑制的敏感性，但是尚缺乏成功的范例，主要原因在于現(xiàn)有酶分子反饋抑制結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系資料不足，不能滿足需要。 |
5樓2014-02-17 17:10:37
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