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關(guān)于包涵體復(fù)性百分之80%全部沉淀，求指教。
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| 小弟在做包涵體復(fù)性時(shí)，開始是用6M鹽酸胍溶解，后經(jīng)鎳柱螯合后換成8M尿素緩沖液，后面復(fù)性時(shí)問題就來了，變性蛋白只要離開8M尿素就開始沉淀，做過階段透析就是先從8M過渡到4M，再到2M或者直接到TRIS-HCL，PH8.5緩沖液里，蛋白大部分沉淀，想請(qǐng)教關(guān)于這種不穩(wěn)定蛋白應(yīng)如何選擇體系，之前試過加0.02%吐溫80，和5%甘油，PEG，GLY無論是稀釋還是透析，結(jié)果均不理想大量沉淀，收率過低。該蛋白正確復(fù)性后其水溶性較好，不知道什么原因包涵體如此不穩(wěn)定。如果用其他表面活性劑后面可能難以進(jìn)行純化。不知道如何是好？請(qǐng)高手指教。如果用鹽酸胍復(fù)性是不是能好些？ |
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5樓2014-02-19 12:36:11
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
| 我最近也在做包涵體復(fù)性的實(shí)驗(yàn)，不知道這個(gè)復(fù)興率有多少，不可能百分百的，所以我的透析完后，還是會(huì)出現(xiàn)少量的沉淀。整體看上去有點(diǎn)極淡藍(lán)色的感覺，不知道是不是可溶的就是復(fù)性成功的。另外，做得是一個(gè)融合蛋白，也不知道酶切融合蛋白產(chǎn)生的目的蛋白就是復(fù)性好的。另外，發(fā)現(xiàn)在目的蛋白下面多出了1條帶，不知道是降解了還是怎么的，一般蛋白不會(huì)降解的，是不是復(fù)性成功的蛋白和沒復(fù)性成功的蛋白會(huì)跑出來不一樣的條帶 |
6樓2014-02-19 14:08:56
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