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AFM木蟲 (正式寫手)
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[交流]
求助 噬菌體培養(yǎng)不出來，怎么辦？謝謝 已有1人參與
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各位戰(zhàn)友，最近作一些噬菌體方面的實(shí)驗(yàn)，按照《分子克隆》里的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行操作，可是沒有噬斑出現(xiàn)（液體也沒變澄清），請戰(zhàn)友看看是不是哪一步有問題，具體試驗(yàn)步驟如下： 一 固體培養(yǎng)基法（測噬菌體的濃度） 取100μL的恥垢分支桿菌（109cfu/mL）與100μL不同稀釋度的噬菌體混勻，于37℃溫育15-20min，然后加入3mL 50℃的軟瓊脂培養(yǎng)基，混勻后倒上層平板，37℃培養(yǎng)，三天后沒有噬菌斑出現(xiàn)。 二液體培養(yǎng)法 取100μL的恥垢（109cfu/mL）與100μL不同稀釋度的噬菌體混勻，于37℃溫育15-20min，然后加入10mL的液體培養(yǎng)基，37℃振搖培養(yǎng)，兩天后液體也沒有變澄清。 三 提取噬菌體DNA 按照《分子克隆》的方法進(jìn)行操作，其中有一步是1010宿主菌與噬菌體（107-108）混勻后，加入500mL新鮮培養(yǎng)基，劇烈振搖（條件所限，我采用200rpm），8-12h后可觀察到液體變澄清，可是培養(yǎng)15h后液體依然渾濁，而且加入氯仿后也沒有變澄清？ 到底是哪里出現(xiàn)問題了，另外問一下恥垢分支桿菌生長至對數(shù)期和穩(wěn)定期各需要多長時(shí)間��！謝謝各位了！ |
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weng1988
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2011-03-24 21:14:44
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