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[求助]
免疫組化，二抗選擇 已有2人參與
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初次做免疫組化，一抗是neurofilament(神經(jīng)絲蛋白NFM,兔多克隆抗體) 和 glial fibrillary acidic protein(神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白，GFAP,兔多克隆抗體)，熒光二抗分別選擇什么？希望兩種二抗一種標(biāo)記綠熒光，另一種標(biāo)記紅熒光。 期待懂得人能指點一下！非常感謝！ |
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jiaolong11a
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【答案】應(yīng)助回帖
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137167741: 金幣+3, 鼓勵交流~~ 2014-02-23 12:50:26
137167741: 金幣+3, 鼓勵交流~~ 2014-02-23 12:50:26
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不知道有幫助嗎：在一些如胸腺、脾臟、血液的組織以及造血細胞、淋巴細胞、B細胞等細胞內(nèi)，通常含有較多的Fc受體，這時候選擇二抗時最好選擇Anti-IgG, F（ab’）2 fragment這樣的特異性二抗，這樣就消除了由于Fc部分與IgG的非特異性結(jié)合。常規(guī)的Anti-IgG （H+L）二抗與IgG的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，即與IgG的Fc的F（ab’）2片段都能結(jié)合；由于IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此Anti-IgG （H+L）與它們都有交叉反應(yīng)。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment經(jīng)過了IgG Fc片段的吸附，因此只與IgG的F（ab’）2片段結(jié)合，然而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此與它們也有交叉反應(yīng)在一些特殊的實驗里，只需要檢測樣本里的IgG或者IgM，常規(guī)的Anti-IgG （H+L）由于與IgG的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此不能特異性的檢測某種類型的IgG或者IgM。這時候就需要針對特殊類型Ig分子的二抗。按照標(biāo)記分，有HRP、AP、生物素等標(biāo)記二抗，F(xiàn)ITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等熒光二抗；按照檢測物種分，有抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉鼠、狗、牛，以及多種細菌類二抗；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同類型抗體 |
9樓2014-02-21 13:31:34
jiaolong11a
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2樓2014-02-20 15:34:35
3樓2014-02-20 16:51:37
jiaolong11a
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【答案】應(yīng)助回帖
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137167741: 金幣+2, BioEPI+1, 鼓勵交流~~ 2014-02-23 12:50:07
137167741: 金幣+2, BioEPI+1, 鼓勵交流~~ 2014-02-23 12:50:07
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同樣學(xué)習(xí)一下：二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產(chǎn)品說明書中都會有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標(biāo)記實驗中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG。 |
4樓2014-02-21 09:15:01
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