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載體構(gòu)建出現(xiàn)讀碼框移位，不知道什么原因，求高手指點。 已有3人參與
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新學載體構(gòu)建，很多東西不明白請多指教。 打算用PET28a 做載體用，怎么插進去讀碼框不移位？我這么做，用NTI 軟件，打開線性化，找到開放閱讀框，從 Ncol開始有ATG，那么如果我選擇BamHI 作為酶切位點，在設(shè)計時要補兩個堿基才能保證讀碼框不移位？GGATCCYYATG---------是這樣嗎？ 可是等我將目的基因黏貼替換之后就像上圖，不知道怎么就移了移位，（將EcoI ---BamHI選中，replace，黏貼后翻轉(zhuǎn)一下）操作錯在哪里了呢？圖1、圖3 對比。 還想問問，Ncol 位點開始的ATG 后邊沒有終止子，是不是這一段也加到我的目的蛋白前面了？ 第三個問題是軟件上的小問題，用NTI軟件怎么我在格式上的修改（字體大小、顏色、密碼子幾個一組）都不能保存？而且有時候沒退出，稍微動一下別的窗口之前的格式設(shè)置都沒有了？請高手指點一下吧。 1.jpg 2.jpg 3.jpg |
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2014-02-23 12:34:05, 48 K
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... 請參照這張圖譜 http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html 翻譯是從NcoI的ATG開始，所以到BamHI時剛好是GGA翻譯為Gly TCC翻譯為Ser，所以誠如上邊同學所答，不用加堿基，不是看NTI自己弄成的三個三個方式，而是要從ATG開始數(shù)的。 祝實驗順利  |
5樓2014-02-23 16:56:09
xuejunwang
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