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大刀闊斧新蟲(chóng) (初入文壇)
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厭氧培養(yǎng)產(chǎn)甲烷菌，只見(jiàn)有氣泡產(chǎn)生，色譜卻測(cè)不出甲烷氣體怎么辦？ 已有1人參與
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我的培養(yǎng)基是 NH4Cl 1.Og， K2HPO4 0.4g， KH2PO4 0.4g， MgCl2 0.1g， 甲酸鈉 3g， 乙酸鈉 3g，酵母膏 0.5g，L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.3g，甲醇 3.5ml， 0.1% 刃天青 1ml， 維生素溶液 10ml，微量元素溶液 10ml。 接種前分別加5% NaHCO3和1%Na2S.9H2O(0.1ml/5ml培養(yǎng)基) pH 7.0 培養(yǎng)產(chǎn)氣后，氣體是手動(dòng)進(jìn)樣 誰(shuí)能幫忙看看是哪有問(wèn)題，為什么測(cè)不出甲烷氣體，氣相色譜儀應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的，之前測(cè)過(guò)。 十分感謝！ |
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liujianmin68
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【答案】應(yīng)助回帖
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既然是培養(yǎng)甲烷菌，應(yīng)該就是在厭氧箱中操作的，如果是這樣，應(yīng)該就用到混合氣，混合氣中有CO2和H2,你的培養(yǎng)基中又有甲酸鹽、乙酸鹽、甲醇等。所以，理論上什么種類的產(chǎn)甲烷菌都會(huì)產(chǎn)生甲烷了。但你的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有甲烷產(chǎn)出，我覺(jué)得有這樣一些問(wèn)題： 1. 為什么甲酸鹽、乙酸鹽、甲醇這三種成分同時(shí)加？再說(shuō)，培養(yǎng)的甲烷菌你應(yīng)該知道是什么種類，也應(yīng)該知道用什么底物啊？如果你所用的菌株是利用乙酸鹽的，那么其它兩種完全不用添加，而且這時(shí)候添加甲醇可能有害處。 2.如果你GC沒(méi)問(wèn)題，而實(shí)驗(yàn)中又確定已經(jīng)產(chǎn)氣，唯一的可能就是你所接的菌株不是產(chǎn)甲烷菌，而且這種可能性很大。你可以在培養(yǎng)裝置中加入抗生素看產(chǎn)氣是否有變化，或者取樣用熒光顯微鏡觀察，看是否具有熒光。 3.你的甲烷菌中混合有其它菌種，而且混合菌種生長(zhǎng)比較快，以至于產(chǎn)氣中基本沒(méi)有甲烷，再多培養(yǎng)幾天看看，也許一周以后檢測(cè)就有甲烷生成了。 |
2樓2014-03-11 14:21:12
大刀闊斧
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非常感謝你的回復(fù)，因?yàn)槭亲霎a(chǎn)甲烷菌的多樣性的，所以想用三種底物都加的培養(yǎng)基，我確實(shí)不知道樣品中有什么樣的產(chǎn)甲烷菌。之前做了加青霉素的對(duì)照組，對(duì)照組也產(chǎn)氣，氣泡都是先小后大，但是也沒(méi)測(cè)出來(lái)甲烷，不過(guò)我沒(méi)有用熒光檢測(cè)，請(qǐng)教一下熒光檢測(cè)是想水清片一樣做個(gè)片子直接在熒光顯微鏡下看嗎？ 還想再問(wèn)一下，我是用棉塞塞的瓶口，在厭氧箱中用進(jìn)樣器抽氣然后封住針頭再拿出去測(cè)氣，這樣甲烷氣體會(huì)漏嗎？ |
3樓2014-03-11 20:09:53
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5樓2014-03-12 09:51:23
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6樓2014-03-13 00:31:55
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7樓2014-03-13 10:14:43
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8樓2014-11-05 21:56:36
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9樓2014-11-05 21:58:27
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