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殺生丸殿下_q銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求救貼壁細(xì)胞TUNEL染色方法 已有1人參與
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使用的試劑盒是南京Vazyme公司 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit 文章投稿使用的DAPI，審稿人要求補(bǔ)充TUNEL，沒(méi)想到這個(gè)鬼實(shí)驗(yàn)這么難搞啊 我們使用的是貼壁神經(jīng)細(xì)胞PC12，加藥處理完畢后，多聚甲醛4度固定1h，然后蛋白酶K通透了30min，專(zhuān)用PBS平衡液平衡30min，最后就是染色37度孵育1h.封片。之后避光保存，由于熒光顯微鏡出了故障，等了大概4h開(kāi)始拍照，調(diào)整參數(shù)是曝光2s，增強(qiáng)4.6倍。問(wèn)題來(lái)了 1.不論是不加藥的CK對(duì)照組，還是加藥凋亡明顯（之前DAPI很明顯）組，鏡頭下幾乎看不到綠光。 2.即使好不容易調(diào)節(jié)出了熒光，染的感覺(jué)也不是細(xì)胞核那種一個(gè)個(gè)圓的，而是一小片一小片的細(xì)胞整體。 請(qǐng)大家解惑，如何改進(jìn)？或者提供經(jīng)驗(yàn)？謝謝 |
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shaohe2013
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
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- 蟲(chóng)號(hào): 2611383
- 注冊(cè): 2013-08-22
- 專(zhuān)業(yè): 中醫(yī)藥學(xué)研究新技術(shù)和新方
2樓2014-03-22 09:18:21
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