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lisa54629新蟲 (初入文壇)
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[交流]
請(qǐng)較大鼠動(dòng)脈環(huán)促血管生成實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)交流
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最近剛開始做大鼠動(dòng)脈環(huán)的實(shí)驗(yàn)，有很多細(xì)節(jié)問題不是很懂，希望能有高手幫忙解答一下，謝謝！ 1）如何才能將動(dòng)脈里的血液都沖干凈，我經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有殘留的血液留在動(dòng)脈環(huán)里 2）膠原配置的方法：我之前采用含丙酮酸鈉1*DMEM稀釋collagen后用NaOH調(diào)節(jié)PH，但是發(fā)現(xiàn)膠原凝結(jié)太快，浪費(fèi)了許多膠原。 3）包埋動(dòng)脈環(huán)的時(shí)候，動(dòng)脈環(huán)常常漂移到培養(yǎng)孔的邊緣而不是中間的位置，不知道這個(gè)問題如何解決 4）大多數(shù)文獻(xiàn)上動(dòng)脈環(huán)的管腔多與培養(yǎng)板底平行，但是我發(fā)現(xiàn)垂直放置似乎更加容易做到放在培養(yǎng)孔中間 5）用顯微鏡拍攝的時(shí)候，應(yīng)該用相差還是亮場(chǎng)的，放大倍數(shù)應(yīng)該多大？我看文獻(xiàn)上都能夠?qū)?dòng)脈環(huán)和周圍所生長的血管全部都拍出來的，一些彩色攝像機(jī)的參數(shù)要怎樣調(diào)節(jié)比較好（我在顯微鏡上看的和攝像頭下看到的不一樣，貌似對(duì)比度差，也不是很清晰的） 6）用什么軟件對(duì)所采集的圖像進(jìn)行快速處理？ VEGF-1.jpg |
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lisa54629
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6樓2014-04-02 16:36:21
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我會(huì)用空針的針頭把環(huán)挑到96孔板中，再加膠，環(huán)會(huì)很自然地變成圓形在孔中間。 血管中不會(huì)用太多血的，多洗幾次就好了。用鑷子擠一擠 拍照之前你加點(diǎn)MTT，會(huì)與活細(xì)胞中線粒體中的琥珀酸脫氫酶形成甲贊，有了顏色，拍照就好看了。 |
2樓2014-03-28 19:20:12
lisa54629
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3樓2014-03-31 15:34:53
4樓2014-04-02 00:24:11
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