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biosun1988新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
加蛋白loading buffer后溶液呈黃色而不是藍(lán)色,是怎么回事兒? 已有2人參與
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提取細(xì)胞蛋白做western, 抗體IP后加蛋白loading buffer,結(jié)果溶液呈現(xiàn)黃色 .input加buffer后是正常的藍(lán)色.這樣是否可以繼續(xù)電泳,或者有什么辦法可以調(diào)回藍(lán)色.另外,在-20C凍存后有的樣品變成藍(lán)色,拿出來(lái)煮沸后全部變成黃色,請(qǐng)問(wèn)各位大俠這是怎么回事兒. |
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yuanyuanlg01
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
biosun1988: 金幣+5, ★★★很有幫助, 解釋了問(wèn)題的原因,很有幫助. 2014-03-25 20:51:36
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
biosun1988: 金幣+5, ★★★很有幫助, 解釋了問(wèn)題的原因,很有幫助. 2014-03-25 20:51:36
| 同意上邊大蝦說(shuō)的，應(yīng)該是PH太低了。不過(guò)之前實(shí)驗(yàn)中好像也有過(guò)類(lèi)似現(xiàn)象，不過(guò)好像也是偶然。不過(guò)變黃的話，如果溴酚藍(lán)沒(méi)問(wèn)題的話就一定是PH的問(wèn)題，會(huì)不會(huì)和你加熱有關(guān)系呢。然后上樣之后溫度下來(lái)了就好了。如果你的樣品中間沒(méi)有發(fā)生不可逆變化（沉淀，變性等等）的話我覺(jué)得可以先不用在意。希望有幫助謝謝，多多交流 |
5樓2014-03-25 20:42:00
biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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biosun1988: 金幣+5, ★★★很有幫助, 解釋了問(wèn)題的原因,很有幫助. 2014-03-25 20:51:25
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biosun1988: 金幣+5, ★★★很有幫助, 解釋了問(wèn)題的原因,很有幫助. 2014-03-25 20:51:25
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你的樣品太酸了 溴酚藍(lán)在pH低于3時(shí)會(huì)變黃 檢查一下你樣品的buffer 如果就只能這樣，一定要用pH 6.8的Tris把pH調(diào)回來(lái)，溴酚藍(lán)在大于4.6的時(shí)候就是藍(lán)色的了，所以你可能需要多加一點(diǎn)Tirs。 不然的話，不連續(xù)SDS-PAGE濃縮分離完全依賴(lài)于pH，可能有影響。 |
2樓2014-03-25 19:30:09
biosun1988
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3樓2014-03-25 20:13:56
biostar2009
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4樓2014-03-25 20:41:13
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