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[求助]
原代心肌成纖維細胞如何傳代培養(yǎng) 已有1人參與
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| 取新生3日齡乳鼠獲得心肌成纖維細胞后，細胞生長緩慢，大約5d呈融合狀態(tài)，此時用0.25%胰酶消化大約1min，傳代培養(yǎng)，但感覺細胞消化過了，想請問一下詳細的傳代過程，如何能使細胞活力最佳 |
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劉大
鐵蟲 (初入文壇)
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- 金幣: 65
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- 在線: 5.6小時
- 蟲號: 3021883
- 注冊: 2014-03-06
- 專業(yè): 免疫反應(yīng)相關(guān)因子與疾病
2樓2014-04-02 13:37:12
3樓2014-04-11 14:42:44
| 我原先也一直對于原代心肌成纖維細胞的傳代頭疼不已，我換用了不同的消化方式，不同的胰酶，現(xiàn)在終于看見了一點曙光。我現(xiàn)在的傳代的方法是細胞PBS沖洗2-3次，加入1ml胰酶（康寧，個人認為在心肌成纖維細胞傳代過程中胰酶這個是最重要的），輕搖胰酶使胰酶鋪滿整個培養(yǎng)瓶底，消化10s，吸盡胰酶，用殘留在瓶底的胰酶繼續(xù)消化，關(guān)瓶口，在鏡下觀察細胞，待大部分細胞變圓變亮，迅速加入3-4ml培養(yǎng)液終止消化，用吸管或槍頭輕輕吹打瓶底，盡量不要產(chǎn)生氣泡，最后將培養(yǎng)液分別等分放入兩個新的培養(yǎng)瓶中。從加入胰酶開始到加入培養(yǎng)基終止消化的時間在1min左右。如果細胞培養(yǎng)瓶瓶底未消化的細胞較多，可以繼續(xù)在原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)細胞。個人意見，僅供參考。 |
4樓2017-12-26 19:23:48
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