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a908363630金蟲 (小有名氣)
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[求助]
抑菌機(jī)理中關(guān)于對(duì)作用菌種的幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶酶活性的影響 已有1人參與
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求高手解惑，本人最近在做某種新提取的天然活性物質(zhì)對(duì)芒果膠孢炭疽菌（一種絲狀真菌）的抑菌機(jī)理的研究，其中需要測(cè)定對(duì)膠孢炭疽菌的幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶的酶活性的影響，可是總是做不出結(jié)果，吸光值很小或?yàn)樨?fù)值，懷疑是粗酶液提取的時(shí)候除了問題，希望高手解答。 我的實(shí)驗(yàn)步驟是這樣的 ： 取待測(cè)樣品0. 5 g（也取過3g,5g), -15℃冷凍固定后加3. 0mL預(yù)冷的乙酸鈉緩沖液(pH5.0),勻漿后冷提2h, 10 000×g離心10m in,上清液為待測(cè)酶液，上清液置于冰箱備用。后續(xù)的幾丁質(zhì)酶活性測(cè)定采用DMAB法，葡聚糖酶活性測(cè)定采用DNS法，反應(yīng)底物分別為膠體幾丁質(zhì)和葡聚糖（大麥提�。�，。 到底是哪里出問題了酶活死活測(cè)不出來，加大菌絲量，上清液透析過夜，等等能想到的方法都想過了，難道是我研磨方法不對(duì)？我是冰浴研磨加石英砂。。。。曾靜預(yù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候測(cè)出來過ＯＤ值，幾丁質(zhì)酶的ＯＤ能達(dá)到０．７，但是正式試驗(yàn)，同樣的步驟死活做不出來了，請(qǐng)教高手誰做過類似的實(shí)驗(yàn)，指導(dǎo)我一下，謝謝。 |
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zhangyt7638
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-03-29 13:44:14
a908363630
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3樓2014-03-29 15:33:47
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