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金娜兒新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
rna電泳 已有2人參與
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RNA變性電泳中1.制備agarose凝膠板：用MOPS～甲醛電極buffer配制1%～1.2%的Agarose，沸水浴融化，冷卻至～60℃，鋪板，濕度盒中保存?zhèn)溆茫ú荒苓^(guò)夜）。 2.制備樣品：3～5μl懸浮溶解的RNA,加樣品處理液3～5μl，65℃加熱15分鐘，冰上冷卻，再加3～5μl RNA-loading buffer,混勻，根據(jù)RNA濃度確定使用量。 3.上樣：將制備樣品用10μl移液器小心慢慢的加入樣品槽中，不得溢出懸浮。 第二歩的樣品處理液是什么？ |
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2樓2014-03-31 08:18:42
biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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formaldehyde agarose gel的loading buffer跟普通的RNA denaturing buffer成分差不多，就是多了一個(gè)formaldehyde。 我建議你直接配一個(gè)這樣的loading buffer： 5x RNA loading buffer 16 μl saturated aqueous bromophenol blue solution 80 μl 500 mM EDTA, pH 8.0 720 μl 37% (12.3 M) formaldehyde 2 ml 100% glycerol 3.084 ml formamide 4 ml 10 x FA gel buffer 這個(gè)是Qiagen推薦的改良版formaldehyde 5X loading buffer，較傳統(tǒng)的2X loading buffer有了很大的改進(jìn)。 |
3樓2014-03-31 09:35:55
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