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ella0602新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于核磁共振做尿液代謝組學(xué)試驗方法的問題 已有1人參與
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由于剛接觸這個，所以問題比較多，我的試驗方案是這樣的，但是有幾個疑惑，希望得到解答，方案如下： 進(jìn)行核磁共振采集信號前，將尿液樣品于室溫下解凍，每個樣品取400ul，加入200ull磷酸緩沖液（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.8 M Na2HPO4），質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%重水（D2O，鎖場），質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05%TSP（內(nèi)標(biāo)）。靜置10min，再于13000g離心10min，取上清測試。 1.關(guān)于所用的PBS，我們常用的都是（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.2 M Na2HPO4）這樣的比例配的，這個方案中用的Na2HPO4是0.8 M，這樣的一個濃度設(shè)定有沒有什么意義？如果我還是用（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.2 M Na2HPO4）這樣的配制方法會不會出來的結(jié)果跟師兄的有差別？另外，可不可以直接買市售的那種固體緩沖劑直接溶解了使用？ 老師說因為樣品都是水溶液，所以壓水峰比較難，那如果這樣的話我用重水來配制緩沖液可不可行？壓水峰會不會容易些？ 2.實驗方案中提到的：質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%重水（D2O，鎖場），質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.05%TSP（內(nèi)標(biāo)），這里的質(zhì)量分?jǐn)?shù)我不是很明白，指的是占最后溶液總體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)嗎？而且重水是液體一般應(yīng)該用體積分?jǐn)?shù)吧？方案里的PBS是用重水還是純水配制的？ 我在其他文獻(xiàn)上看到有這種方法：尿樣取400ul，加入200ul含0.05%TSP的重水配制的磷酸緩沖液，這個方案的PBS是用重水配置的，不知道跟上面那個有什么不同？ 3.內(nèi)標(biāo)用TSP和DSS有什么不同？我看國外的文獻(xiàn)中做尿液的內(nèi)標(biāo)大部分用的都是TSP。 3.低溫冷凍離心這一步是不是必須的？有沒有其他可替代的方法？ 希望得到專業(yè)解答，多謝！ |
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