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[求助]
大腸桿菌 鈣離子誘導轉化 Amp篩選 重組質粒 已有1人參與
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| 我們這段時間一直在做大腸桿菌BL21的轉化，采用的質粒是以PET32a質粒。前段時間轉化成功了，留種后復蘇在Amp液體培養(yǎng)基上不生長。此后按照前面轉化成功的條件卻轉化不進去了。 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+5, 鼓勵。 2014-04-10 17:14:18
感謝參與，應助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+5, 鼓勵。 2014-04-10 17:14:18
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樓主提到的現(xiàn)象可能有幾個方面的問題： 1、質粒。 這個大腸桿菌BL21的轉化我們一般都是直接轉已經(jīng)做好的質粒。如果質粒是需要兩個片段連接的，我們一般會現(xiàn)在EcoliDH5a中做好，然后提質粒轉BL21。 2、轉化。不同實驗方法和不同操作會導致同一個菌株的轉化效率不同。前面的菌種后面長不起來，這種現(xiàn)象少見，不知道具體原因。重新轉化轉不進去，要么是感受態(tài)不行了，要么是轉化沒有做好。感受態(tài)不行了，重新做，或者找做超級感受態(tài)的方法，做好的感受態(tài)細胞-80度保存。 3、假陽性。因為amp的板子很容易長出來假陽性，所以務必要檢測驗證。得到的真克隆需長時間保存的話用甘油-80度凍存。 |
2樓2014-04-10 10:32:50
3樓2014-04-10 10:41:37
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