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呀薯?xiàng)l金蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌落PCR 已有7人參與
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我在做目的基因與載體的連接，自己做的感受態(tài)，做完連接后涂布與含有氨芐的平板，做了四五次，只有兩次平板有菌落長出，挑取單菌落，進(jìn)行菌落PCR，可是一直沒有結(jié)果（電泳條帶只有200bp左右），這是什么原因啊？ 那個(gè)平板在冰箱中放了四五天了，我可以繼續(xù)再挑取單菌落，重新進(jìn)行次菌落PCR嗎？一直PCR沒有結(jié)果的原因會(huì)不會(huì)是自己的目的基因擴(kuò)增所用的引物與載體上某一部位連接起來了��？ 我快要糾結(jié)死了，求指導(dǎo)！ |
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2樓2014-04-14 17:28:26
Neo2000
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3樓2014-04-14 18:19:37
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4樓2014-04-14 20:20:35
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5樓2014-04-14 20:52:11
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6樓2014-04-14 21:06:33
lvbobo823
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7樓2014-04-14 21:20:54
grape_vine
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首先懷疑你感受態(tài)效率 第二你只有兩次轉(zhuǎn)化做出來了，到底長了幾個(gè)斑？要是沒幾個(gè)的話，建議買個(gè)商用的感受態(tài)試試 你的菌落pcr的引物是設(shè)計(jì)在載體兩端還是設(shè)計(jì)在你的目的基因上面？你自己完全可以判斷是不是連接上去了，你什么都不說，大家在這里瞎猜是什么自連啊之類的，不是浪費(fèi)你時(shí)間嗎？ |
8樓2014-04-15 08:31:21
9樓2014-04-15 09:06:25
呀薯?xiàng)l
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